膽堿能α7受體激動劑對燒沖復合傷休克期血管內皮細胞的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：燒沖復合傷引起的低血容量休克,是傷員發(fā)生早期死亡和后期并發(fā)癥的主要原因之一,而血管內皮細胞損傷則是休克期血流動力學紊亂和臟器功能損害的病理生理基礎。本文擬采用重度燒沖復合傷犬和犬臍靜脈血管內皮細胞為模型,研究膽堿能N樣α7受體激動劑對犬燒沖復合傷血管內皮細胞的保護作用及其機制,為臨床燒沖復合傷早期抗休克治療提供新的思路和實驗依據。
　　方法一:1.選取Beagle犬,采用黑索金爆炸致沖擊傷,而后用凝固汽油燃燒造成35％TBS

2、AⅢ°燒傷,建立中度沖擊傷+重度燒傷的犬重度燒沖復合傷模型。2.將實驗動物隨機化分為:假傷對照組;燒傷組;沖擊傷組;燒沖復合傷組;燒沖復合傷不復蘇組和燒沖復合傷PNU282987組。測定血流動力學指標、血氣、血炎癥介質和粘附因子的水平、肝腎功能以及24小時尿量;計算氧輸量和氧耗量;測定血漿容量及血管通透性的變化。傷后24h采用放血法處死犬,測定臟器含水量,取肺組織行病理診斷和微血管內皮細胞連接蛋白免疫組化。
　　方法二:1.取新生

3、犬臍帶,采用膠原酶分別消化不同時間,提取臍靜脈血管內皮細胞。采用臺盼藍染色進行細胞計數。而后經細胞培養(yǎng),取第3代細胞進行鑒定,建立犬臍靜脈血管內皮細胞提取、培養(yǎng)方法。2.酶消化法提取的犬臍靜脈血管內皮細胞,以第3代為實驗細胞。給予燒沖復合傷血清刺激,分別給予煙堿和蛋白激酶C、Rho激酶的阻斷劑和激動劑干預,測定其單層血管內皮細胞的通透性;分析各組血管內皮細胞連接蛋白以及上游調控因子的表達。
　　結果一:1.5g黑索金爆炸,通過大體

4、解剖及肺臟組織病理HE染色證實:距離爆炸源50cm的比格犬可被爆炸致中度沖擊傷,結合凝固汽油燃燒致35%TBSA重度燒傷,結合上述兩步致傷可建立犬重度燒沖復合傷模型。2.燒沖復合傷后血管內皮細胞嚴重受損,屏障功能失衡,血管通透性增高,組織水腫,血容量驟減,循環(huán)系統(tǒng)呈低排高阻,臟器缺血缺氧更為嚴重;膽堿能α7受體激動劑可以顯著減低血管通透性和組織水腫,提高血容量,改善血流動力學和肺通氣換氣,糾正臟器的缺血缺氧狀態(tài)。
　　結果二:1.

5、1%Ⅰ型膠原酶消化7min可從全臍靜脈提取大量多角形細胞,免疫熒光染色和流式細胞儀均可以鑒定該細胞為血管內皮細胞。2.燒沖復合傷犬血清刺激血管內皮細胞后,細胞連接蛋白的表達顯著下降,其上游的調節(jié)蛋白(蛋白激酶C和ROCK1)的表達則顯著升高,單層細胞通透性顯著提高;而加入煙堿或膽堿能受體激動劑均可以抑制其過高的通透性,降低蛋白激酶C和ROCK1,提高連接蛋白的表達;但給予受體阻斷劑或提高蛋白激酶C和Rho激酶的活性后則可以抑制該的效果。