表達(dá)GDNF的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞治療帕金森病的實驗研究.pdf

1、表達(dá)GDNF的骨做基質(zhì)十細(xì)胞治療帕?xí)〉膶嶒炑芯恐形奶嵋磉_(dá)GDN「的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞治療帕金森病的實驗研究中文提要帕金森病(ParkinsonsdiseasePD)是60歲以上患者高發(fā)的一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其主要特征是由于黑質(zhì)紋狀體多巴胺(DA)神經(jīng)元缺失，臨床表現(xiàn)為運(yùn)動徐緩、靜止性震顫、齒輪樣強(qiáng)直等癥狀。但目前仍沒有有效的方法中止和延緩黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的進(jìn)行性病變。近年來，PD的治療的研究發(fā)展迅速，方法也是多種多樣，基因治療已進(jìn)入

2、臨床實驗。由于表達(dá)穩(wěn)定、表達(dá)時程長，干細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療己成為目前研究的熱點，因此，本文對應(yīng)用表達(dá)GDNF的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞治療帕金森病進(jìn)行了初步研究。細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療的療效取決于兩個方面，即目的基因和載體細(xì)胞。根據(jù)文獻(xiàn)報道，我們選擇膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glialcelllinederivedneurotrophicfactorGDNF)為目的基因。GDNF是中腦多巴胺神經(jīng)元的神經(jīng)營養(yǎng)因子，也是TGF你超家族中的一員，被認(rèn)為是目前

3、保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元最有效的神經(jīng)生長因子，以往的實驗表明GDNF長期作用下可以顯著增加黑質(zhì)紋狀體的多巴胺能神經(jīng)元的數(shù)量，并能有效改善其神經(jīng)缺失癥狀。我們在第一部分實驗中，從大鼠的胎腦組織中成功地克隆了GDNF全長。DNA序列，測序結(jié)果與Genebank完全一致。中樞神經(jīng)系統(tǒng)移植的載體細(xì)胞應(yīng)具備以下特點:(1)細(xì)胞容易分離獲取(2)能夠在體內(nèi)長期存活(3)有效地表達(dá)目的基因(4)不會引起宿主的免疫排斥反應(yīng)。目前多種供體細(xì)胞己應(yīng)用于神經(jīng)移植，

4、如成纖維細(xì)胞，雪旺氏細(xì)胞，星型膠質(zhì)細(xì)胞，’腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞，胎腦多巴胺能神經(jīng)元，都取得了一定的療效。但仍然存在著一些問題，如成纖維細(xì)胞容易表達(dá)GDNF的骨簡基質(zhì)細(xì)胞治療帕金森病的實驗研究第一部分第一部分大鼠GDNF的克隆和序列分析摘要目的克隆大鼠全長GDNFcDNA序列，以研究其功能。方法根據(jù)報道的大鼠GDNFcDNA序列，設(shè)計引物，采用RTPCR方法，從SD大鼠胎鼠腦組織中抽提總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄、PCR得到全長GDNF，經(jīng)雙酶切定向克隆

5、入pCDNA3載體，并進(jìn)行鑒定。測定序列，與Genebank中報道的序列比較。結(jié)果RTPCR產(chǎn)物為約560bp片段，與預(yù)計值一致酶切鑒定、PCR鑒定均證實GDNF片段己插入pCDNA3載體序列測定結(jié)果與Genebank中的報道完全一致。結(jié)論成功從大鼠胎腦組織中克隆了全長GDNFcDNA序列。關(guān)鍵詞大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子RTPCR克隆ClongingandsequenceofratGNFcDNAObjectiveTocloneGDN

6、FcDNAofSDrattoinvestigateitsfunction.MethodsAccordingtothereportedsequenceofratGDNFcDNAprimersweredesigned.ByRTPCRGDNFcDNAwasobtainedfromthebraincortexofneonatalSDratwhichwascorrectlyinsertedintopCDNA3vector.Theresultofs

7、equencingwasanalyzedcomparedwiththereportedResultsTheproductsofRTPCRwas560bpwhichwasunderanticipation.ByenzymecleavageandPCRassayGDNFcDNAwasactuallyinsertedintopCDNA3vector.TheresultsofsequencewasidenticaltotheoneinGeneb