慢性再障患兒外周血端粒長度及端粒酶基因突變的研究.pdf

1、再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA簡稱再障）是常見的骨髓衰竭性疾病，是兒童時期嚴(yán)重的血液系統(tǒng)疾病之一，臨床表現(xiàn)為貧血、出血及感染等。其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，臨床表現(xiàn)多樣化，因此，個體化治療及預(yù)后判斷均有一定的難度。目前認(rèn)為AA的發(fā)病是由于多種致病因素引起造血干細(xì)胞減少或損傷、T淋巴細(xì)胞功能異?？哼M(jìn)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞直接殺傷和淋巴因子介導(dǎo)的與免疫相關(guān)的造血干細(xì)胞過度凋亡而造成骨髓造血功能衰竭。
　　近年來，端粒、端粒

2、酶與細(xì)胞衰老、癌變及DNA修復(fù)的密切關(guān)系逐漸引起國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。端粒是真核細(xì)胞內(nèi)線性染色體末端的一種特殊的“帽狀”結(jié)構(gòu)，其主要功能是保持染色體的完整性，避免染色體末端融合、重組和丟失，維持細(xì)胞的復(fù)制能力。端粒隨細(xì)胞的復(fù)制、分裂進(jìn)行性縮短，達(dá)到一定程度后不能維持染色體的穩(wěn)定性，細(xì)胞便走向衰老死亡。端粒長度的維持和延伸需要端粒酶的活性作用，端粒酶是一種核糖核蛋白復(fù)合體，以其自身的RNA為模板，通過端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶組分及相關(guān)蛋白不斷在染色體末

3、端合成端粒序列。端粒酶活性的異?？梢砸鸲肆ｉL度的改變。
　　既往研究表明，攜帶端粒酶基因突變的再障患者端粒酶活性下降，外周血單個核細(xì)胞端粒長度縮短。兒童造血骨髓容量相對多于成人，且骨髓造血功能代償能力較強(qiáng)，有實(shí)驗(yàn)顯示，再障患兒骨髓造血干細(xì)胞端粒酶活性升高，那么其外周血端粒長度的變化如何？是否有端粒酶基因突變？本文擬就此進(jìn)行初步研究。
　　目的：
　　探討慢性再生障礙性貧血患兒外周血白細(xì)胞端粒長度變化及端粒酶TERC、

4、TERT基因突變情況。研究端粒長度與端粒酶基因突變在再障患兒發(fā)病及病情進(jìn)展中的臨床意義，為判斷預(yù)后及指導(dǎo)個體化治療提供參考。
　　材料與方法：
　　選取2011年6月至2013年6月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院及第三附屬醫(yī)院就診的慢性再生障礙性貧血患兒，其中初次確診未接受免疫抑制治療者24例，接受免疫抑制治療后基本治愈、緩解及明顯進(jìn)步（有效組）患兒36例，接受免疫治療無效者9例，三組患兒性別、年齡、病程無顯著性差異。同時隨機(jī)選擇同期

5、于鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院進(jìn)行體檢的年齡及性別匹配的健康兒童35例。利用實(shí)時熒光定量PCR法檢測端粒相對長度，對端粒酶TERC、TERT1、TERT2基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因測序。結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。端粒酶基因序列分析結(jié)果與PubmedBLAST中正常TERC、TERT1、TERT2基因序列進(jìn)行比對。
　　結(jié)果：
　　1.初診組端粒長度相對T/

6、S比率為0.756±0.299，較正常對照組0.980±0.374縮短(P=0.017)。
　　2.經(jīng)IST有效組端粒長度相對T/S比率為0.877±0.398，與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.247)。經(jīng)IST無效組端粒長度相對T/S比率0.561±0.228，與正常對照組及IST有效組相比均縮短（P＜0.05）。
　　3.69例AA患兒及35例正常對照組測序結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)TERC、TERT1、TERT2基因突變。