抑制AQP1表達(dá)對(duì)Balb-c 3T3成纖維細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的 水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)維持細(xì)胞的正常代謝具有重要作用。1992年以來大量研究證實(shí)機(jī)體內(nèi)廣泛存在著特異性的水通道蛋白家族(Aquaporins，AQPs)。 AQP1在體內(nèi)扮演著重要角色，參與滲透壓驅(qū)動(dòng)下的水的轉(zhuǎn)運(yùn)，介導(dǎo)藥理作用，和參與水腫的形成等。但AQP1與凋亡之間是否存在著聯(lián)系，現(xiàn)在還有爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用特異性靶向AQP1表達(dá)基因的siRNA(short interfering RNA)，抑制小鼠Balb/c 3T3成纖維細(xì)胞的

2、AQP1的表達(dá)。并通過觀察α-溶血素對(duì)這種AQP1表達(dá)受抑制的細(xì)胞所造成的表型變化，初步探討AQP1在細(xì)胞凋亡中的作用。 方法 1、實(shí)驗(yàn)分三組：normal cell組，為正常細(xì)胞； control—RNAi組，為非特異性靶向AQP1的siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；AQP1-RNAi組，為特異性靶向AQP1的siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。應(yīng)用α-溶血素(30ug/ml)作用于細(xì)胞，4h后觀察細(xì)胞的表型的變化。 2、western

3、 blot檢測(cè)AQP1蛋白量，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞術(shù)檢驗(yàn)細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果 1、利用RNAi轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制成纖維細(xì)胞Balb/c3T3的AQP1表達(dá)，western blot驗(yàn)證AQP1蛋白表達(dá)。AQP1-RNAi組AQP1表達(dá)較normalcell組減少60.55％，較control-RNAi組減少48.85％。 2、加入適量的α-溶血素(30ug/ml)，4h后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，觀察到norma

4、l cell組凋亡率為6.07％，control-RNAi組凋亡率為6.71％，AQP1-RNAi組凋亡率為9.76％。各組均出現(xiàn)亞二倍峰，凋亡率都較未加毒素時(shí)有所增加。且AQP1-RNAi組凋亡率，較正常細(xì)胞組增加3.69％，較control-RNAi組增加3.05％。倒置顯微鏡檢測(cè)，觀察到各組均出現(xiàn)凋亡相關(guān)的形態(tài)學(xué)變化，主要表現(xiàn)為細(xì)胞變圓、皺縮、反光增強(qiáng)，與臨近細(xì)胞分離，脫落。AQP1-RNAi組發(fā)生變化的細(xì)胞及脫落細(xì)胞的數(shù)目較其余