惡性血液病侵襲性曲霉菌感染實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的建立與臨床應(yīng)用.pdf

1、背景：近二十多年來(lái)，侵襲性真菌感染在惡性血液病的發(fā)生率逐年提高，其中曲霉菌所致的感染已成為僅次于念珠菌感染的第二大深部真菌病。早期快速準(zhǔn)確診斷和治療可有效減少真菌耐藥的發(fā)生，顯著提高患者的生存率。然而，傳統(tǒng)的血培養(yǎng)檢查耗時(shí)較長(zhǎng)且敏感性較低，影像學(xué)方法缺乏特異性，所以探索一種快速可靠檢測(cè)曲霉菌感染的診斷方法已成為臨床實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。
　　 目的：結(jié)合本課題組的前期研究，通過(guò)自行設(shè)計(jì)引物，建立與評(píng)價(jià)侵襲性曲霉菌病實(shí)時(shí)定量PCR診

2、斷技術(shù)，以期為侵襲性曲霉菌病提供快速、準(zhǔn)確的早期診斷方法為臨床診斷提供參考。對(duì)收集的臨床高度疑似曲霉菌感染病人的血標(biāo)本進(jìn)行單盲檢測(cè)，評(píng)價(jià)其臨床診斷效能。
　　 方法：(1)利用Blast和DNAMAN軟件工具在GeneBank數(shù)據(jù)庫(kù)中查找黑曲霉、構(gòu)巢曲霉的高度保守序列。對(duì)目的基因序列進(jìn)行自行設(shè)計(jì)PCR引物；制備標(biāo)準(zhǔn)品并制定熒光PCR定量標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行評(píng)價(jià)。(2)收集臨床血液標(biāo)本，進(jìn)行DNA提取，并進(jìn)行熒光PCR單盲檢測(cè)，與實(shí)驗(yàn)室

3、傳統(tǒng)的血培養(yǎng)和GM實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析。
　　 結(jié)果：(1)：熒光PCR定量標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=-3.538 X+42.104，R2=0.9996(黑曲霉)；Y=-3.380X+43.474，R2=0.9990(構(gòu)巢曲霉)。熒光PCR檢測(cè)的批內(nèi)和批間的變異系數(shù)小，重復(fù)性好，特異性高。(2)：與GM實(shí)驗(yàn)比較，熒光PCR可以檢測(cè)到GM的假陰性，其敏感性較高。
　　 結(jié)論：成功建立了侵襲性曲霉菌病熒光PCR診斷技術(shù)，具有較高的敏