課題一：重組腺病毒AdTIMP-3抗白血病作用的體內(nèi)外研究;課題二：經(jīng)脾單劑量裸DNA免疫制備抗SARS-CoV病毒S蛋白單克隆抗體.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文課題一：重組腺病毒AdTIMP3抗白血病作用的體內(nèi)外研究課題二：經(jīng)脾單劑量裸DNA免疫制備抗SARSCoV病毒S蛋白單克隆抗體姓名：余曉菲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：韓忠朝20050901中國(guó)協(xié)和區(qū)科大學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文AdGFP、AdTIMP3及PBS，其后第5及第10天重復(fù)治療。21天后處死裸鼠，剝離瘤塊進(jìn)行組織學(xué)檢查。結(jié)果：自胎盤組織中擴(kuò)增出676bDTIMP3cDNA

2、連接入穿梭質(zhì)粒中，構(gòu)建重組腺病毒。AdTlMP3經(jīng)擴(kuò)增純化后滴度達(dá)到12510”PFU，mL，對(duì)照病毒AdGFP為8x10PFU，mL。K562細(xì)胞及HUVECs的最佳M01分別為200和20，感染效率達(dá)到80％。Westemblot試驗(yàn)在AdTIMP3感染的K562細(xì)胞培養(yǎng)上清及裸鼠AdTlMP3治療組的腫瘤裂解液中均可以檢測(cè)到糖基化和非糖基化的TlMP3蛋白表達(dá)。與對(duì)照組相比，AdTIMP3感染并不影響K562細(xì)胞的增殖但可顯著抑制

3、其穿過(guò)ECM膠的侵襲能力(Pc001)。臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)計(jì)數(shù)結(jié)果表明，與K562對(duì)照細(xì)胞及AdGFP感染的K562細(xì)胞來(lái)源的條件培養(yǎng)上清相比，AdTIMP一3感染的K562細(xì)胞來(lái)源的條件培養(yǎng)基對(duì)HUVECs的促增殖作用下降了185倍，對(duì)HUVECs的遷移誘導(dǎo)能力下降了2倍，并明顯抑制了HUVECs的體外管狀結(jié)構(gòu)形成能力。明膠酶譜分析證明AdTIMP一3直接感染HUVECs可以下調(diào)VEGF刺激的其MMP之的表達(dá)與激活。治療3周后AdTIMP

4、3治療組移植瘤體積(91074士158mm3)遠(yuǎn)小于AdGFP組(24407152162mm。)及PBS對(duì)照組(25536754849mm。)。腫瘤組織H＆E染色顯示AdTIMP3治療組腫瘤有大片的壞死灶；免疫組化CD31染色顯示每x200倍視野中AdTlMP一3組、AdGFP組及PBS對(duì)照組腫瘤微血管數(shù)分別為11223、29252和29848；腫瘤組織中SMA免疫組化染色顯示每x200倍視野中AdTlMP一3組、AdGFP組及PBS對(duì)

5、照組每200倍視野中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為3212、10224和1O619：TUNEL顯示AdTlMP3治療組的腫瘤組織中的腫瘤細(xì)胞凋亡水平顯著增高。結(jié)論：重組TlMP3腺病毒感染顯著抑制白血病細(xì)胞株K562的侵襲能力但對(duì)于其體外增殖并沒(méi)有抑制作用，TIMP一3的過(guò)表達(dá)可以顯著抑制K562細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和體外管狀形成能力的促進(jìn)作用，AdTIMP一3治療可通過(guò)抑制移植瘤內(nèi)血管新生及成熟而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而顯著抑制K