課題一：重組腺病毒AdTIMP-3抗白血病作用的體內(nèi)外研究;課題二：經(jīng)脾單劑量裸DNA免疫制備抗SARS-CoV病毒S蛋白單克隆抗體.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文課題一：重組腺病毒AdTIMP3抗白血病作用的體內(nèi)外研究課題二：經(jīng)脾單劑量裸DNA免疫制備抗SARSCoV病毒S蛋白單克隆抗體姓名：余曉菲申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：韓忠朝20050901中國協(xié)和區(qū)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文AdGFP、AdTIMP3及PBS，其后第5及第10天重復(fù)治療。21天后處死裸鼠，剝離瘤塊進行組織學(xué)檢查。結(jié)果：自胎盤組織中擴增出676bDTIMP3cDNA

2、連接入穿梭質(zhì)粒中，構(gòu)建重組腺病毒。AdTlMP3經(jīng)擴增純化后滴度達到12510”PFU，mL，對照病毒AdGFP為8x10PFU，mL。K562細胞及HUVECs的最佳M01分別為200和20，感染效率達到80％。Westemblot試驗在AdTIMP3感染的K562細胞培養(yǎng)上清及裸鼠AdTlMP3治療組的腫瘤裂解液中均可以檢測到糖基化和非糖基化的TlMP3蛋白表達。與對照組相比，AdTIMP3感染并不影響K562細胞的增殖但可顯著抑制

3、其穿過ECM膠的侵襲能力(Pc001)。臺盼藍排斥試驗計數(shù)結(jié)果表明，與K562對照細胞及AdGFP感染的K562細胞來源的條件培養(yǎng)上清相比，AdTIMP一3感染的K562細胞來源的條件培養(yǎng)基對HUVECs的促增殖作用下降了185倍，對HUVECs的遷移誘導(dǎo)能力下降了2倍，并明顯抑制了HUVECs的體外管狀結(jié)構(gòu)形成能力。明膠酶譜分析證明AdTIMP一3直接感染HUVECs可以下調(diào)VEGF刺激的其MMP之的表達與激活。治療3周后AdTIMP

4、3治療組移植瘤體積(91074士158mm3)遠小于AdGFP組(24407152162mm。)及PBS對照組(25536754849mm。)。腫瘤組織H＆E染色顯示AdTIMP3治療組腫瘤有大片的壞死灶；免疫組化CD31染色顯示每x200倍視野中AdTlMP一3組、AdGFP組及PBS對照組腫瘤微血管數(shù)分別為11223、29252和29848；腫瘤組織中SMA免疫組化染色顯示每x200倍視野中AdTlMP一3組、AdGFP組及PBS對

5、照組每200倍視野中陽性細胞數(shù)分別為3212、10224和1O619：TUNEL顯示AdTlMP3治療組的腫瘤組織中的腫瘤細胞凋亡水平顯著增高。結(jié)論：重組TlMP3腺病毒感染顯著抑制白血病細胞株K562的侵襲能力但對于其體外增殖并沒有抑制作用，TIMP一3的過表達可以顯著抑制K562細胞條件培養(yǎng)基對于內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和體外管狀形成能力的促進作用，AdTIMP一3治療可通過抑制移植瘤內(nèi)血管新生及成熟而導(dǎo)致腫瘤細胞的凋亡，從而顯著抑制K