腺相關(guān)及腺病毒內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染和Rb敲除結(jié)合ISL1表達誘導小鼠毛細胞與支持細胞增殖.pdf

1、復(fù)旦大學博士學位論文腺相關(guān)及腺病毒內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染和Rb敲除結(jié)合ISL1表達誘導小鼠毛細胞與支持細胞增殖姓名：舒易來申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：王正敏20120410復(fù)旦大學博士論文Rbl并過表達內(nèi)耳前體細胞基因ISLI誘導新生及成年小鼠耳蝸毛細胞與支持細胞的增殖的研究。第一部分：5型腺病毒經(jīng)中階路徑注射轉(zhuǎn)染新生和成年小鼠耳蝸毛細胞和支持細胞的評價【目的】為了研究5型腺病毒攜帶目的基因經(jīng)新生和成年小鼠中階入路導入轉(zhuǎn)染內(nèi)耳細

2、胞的可行性，為以小鼠為動物模型的內(nèi)耳基因治療提供實驗基礎(chǔ)和解剖學依據(jù)【方法】采用納升級顯微操作系統(tǒng)，經(jīng)中階顯微注射攜帶增強型綠色熒光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProteinEGFP)基因的5型重組腺病毒或人工內(nèi)淋巴液于各年齡段的小鼠耳蝸(pl，p4，p7，p12，p21，卜2M)，內(nèi)耳注射4天后取雙側(cè)耳蝸標本做基底膜鋪片，觀察EGFP表達情況。【結(jié)果】p1、P4、P7組：術(shù)后第4天見耳蝸底圈、中圈支持細胞表達

3、GFP。p12、p21、I2M組：術(shù)后第4天可見耳蝸底圈、中圈支持細胞及部分內(nèi)毛細胞表達EGFP。在人工內(nèi)淋巴液和未注射耳，未見EGFP表達?！窘Y(jié)論】采用經(jīng)中階入路顯微注射5型腺病毒攜帶目的基因?qū)胄律蠹俺赡晔竽軌驅(qū)⒛康幕虺晒D(zhuǎn)染至耳蝸組織并表達。第二部分：12種腺相關(guān)病毒經(jīng)中階路徑注射轉(zhuǎn)染新生和成年小鼠耳蝸毛細胞和支持細胞的比較【目的】為了比較12種腺相關(guān)病毒攜帶目的基因經(jīng)新生和成年小鼠中階入路導入內(nèi)耳的可行性，尋找新的更安全的載