茶（紅茶）與茶（Camellia sinensis）花多酚類物質(zhì)的分離鑒定及其抗氧化機(jī)理研究.pdf

1、第1部分茶黃素單體的分離與紅茶多酚衍生物質(zhì)的抑菌、抗氧化活性與機(jī)制研究 多酚類物質(zhì)的抗氧化作用被認(rèn)為是茶葉保健抗癌最重要的作用機(jī)理。大量生物體內(nèi)、體外研究和流行病學(xué)調(diào)查等都證實(shí)了綠茶及其多酚類物質(zhì)-兒茶素具有良好的抗氧化功效。一直以來綠茶及其活性成分-兒茶素的研究備受關(guān)注，而紅茶在世界茶消費(fèi)中占80％，所以，近十年來其多酚類衍生物質(zhì)一茶黃素與茶紅素的生物活性也逐漸引起研究學(xué)者的重視。本研究采用體外、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)估紅茶中多酚衍生物質(zhì)

2、-茶色素的抗氧化活性并利用LC-MS與NMR技術(shù)從化學(xué)結(jié)構(gòu)的角度對(duì)其抗氧化機(jī)制進(jìn)行討論。 主要研究結(jié)果如下： 1．本研究首先采用固定化酶催化茶多酚氧化，所得產(chǎn)物為茶黃素復(fù)合物；其次利用高速逆流色譜(HSCCC)分離茶黃素單體，比較不同溶劑系統(tǒng)與NaHC03前處理對(duì)其分離效果的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：采用溶劑系統(tǒng)乙酸乙酯、正己烷、甲醇和水(3∶1∶1∶6，V/V)與(3∶1∶3∶4，V/V)結(jié)合分離具有較佳的分離效果；NaHC

3、O<,3>前處理明顯有助于茶黃素單體的分離；當(dāng)流動(dòng)相速度1.2 ml/min、儀器轉(zhuǎn)速880 r/min時(shí)，能達(dá)到最好的分離效果；從250 mg茶黃素復(fù)合物中分離所得57 mg 97.7％茶黃素(theaflavin)、26 mg 61.2％茶黃素-3'-單沒食子酸酯(theaflavin-3'-gallate)、64 mg 84.5％茶黃素-3，3'-雙沒食子酸酯(theaflavin-3,3'-gallate)與33 mg of 9

4、2.3％茶黃素單食子酸酯(theaflavin-3-gallate and theaflavin-3'-gallate)。 2．采用微生物實(shí)驗(yàn)方法比較了茶黃素復(fù)合物和茶多酚對(duì)口腔兩種主要致病菌變鏈菌族的S．mutans Ingbritt和S.sobrinus 6715的抑制作用及其對(duì)細(xì)菌產(chǎn)酸能力的影響。結(jié)果表明茶黃素具有較強(qiáng)的抑菌和殺菌能力，與茶多酚相比無顯著性差異，且變鏈菌對(duì)兩種多酚化合物均未產(chǎn)生耐藥性。 體外模擬紅茶

5、中酶促氧化過程制備三類主要多酚氧化產(chǎn)物-茶黃素、茶紅素及茶褐素，并對(duì)這三類產(chǎn)物的體外清除羥自由基、DPPH自由基能力，及其對(duì)HPF-1細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明茶黃素在上述體系中顯示了最強(qiáng)的抗氧化能力，茶褐素次之，茶紅素最弱，且這三類物質(zhì)均可通過清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧保護(hù)HPF-1細(xì)胞。值得關(guān)注的是，對(duì)紅茶品質(zhì)具有消極影響的茶褐素卻具有接近于茶黃素的活性，因此有必要深入研究紅茶中每一種多酚氧化產(chǎn)物的生物活性，對(duì)正確評(píng)估其在紅茶

6、保健作用中的貢獻(xiàn)具有重要的意義。 以EGCG為對(duì)照，對(duì)茶黃素主要單體茶黃素(TF1)、茶黃素單沒食子酸酯(TF2)與茶黃素雙沒食子酸酯(TF3)的體外清除羥自由基、DPPH自由基能力，及其對(duì)HPF-1細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明，對(duì)羥自由基的清除能力依次為TF3>TF2>TF1>EGCG；對(duì)DPPH自由基清除能力依次為TF3>TF2>EGCG>TF1；茶黃素各單體對(duì)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)氧化損傷的HPF-1細(xì)胞具有

7、保護(hù)作用，且強(qiáng)于：EGCG。除了清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧外，TF3與TF1還可能通過提高細(xì)胞抗氧化體系，保護(hù)H<,2>O<,2>誘導(dǎo)氧化損傷的HPF-1細(xì)胞。TF2對(duì)正常HPF-1細(xì)胞則表現(xiàn)出最強(qiáng)的增殖作用。 第2部分茶(Camellia sinensis)花中多酚類組成分析及其抗氧化活性與機(jī)理研究 長期以來，人們只是重視茶樹芽葉的生產(chǎn)加工，對(duì)于具有豐富資源的茶樹花朵任其自生自滅，造成資源的大量浪費(fèi)。已有研究表明茶花含有與茶鮮

8、葉相似的重要生化成分如多酚、咖啡堿，多糖和蛋白質(zhì)等。本研究對(duì)茶花中黃酮類等重要化學(xué)成分進(jìn)行分離和鑒定，對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行評(píng)估，并利用HPLC與LC-MS技術(shù)從化學(xué)結(jié)構(gòu)的角度對(duì)其抗氧化機(jī)制進(jìn)行闡明。 1．采用不同的有機(jī)溶劑，分步萃取冷凍干燥茶花的70％乙醇提取物與水提物，得到氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和萃取后剩余物。采用有機(jī)自由基二苯基苦基偕腙肼(DPPH)的分光光度法及其化學(xué)發(fā)光法，比較各提取物的抗氧化能力。結(jié)果表

9、明茶花醇提物比水提物具有更強(qiáng)的清除自由基能力，且醇提物的乙酸乙酯萃取組分(EEA)在所有組分中具有最強(qiáng)的抗氧化活性，同時(shí)對(duì)茶花的抗氧化能力具有最大的貢獻(xiàn)率。通過對(duì)各萃取組分的化學(xué)成分測定，表明其抗氧化活性與其多酚類物質(zhì)有關(guān)。 2．通過液質(zhì)聯(lián)用分析從茶花乙酸乙酯層中鑒定出3類化合物： a．兒茶素類：兒茶素、表兒茶素、沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素、兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒