多位點酶切聯(lián)合SSCP方法檢測結(jié)核桿菌inhA全基因突變.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:近20年來,全球結(jié)核病的發(fā)病率上升,已成為最嚴重的傳染病之一.同時結(jié)核分支桿菌耐藥菌株持續(xù)增加,嚴重威脅著結(jié)核病的控制和治療.異煙肼是最重要的一線抗結(jié)核化療的藥物,已發(fā)現(xiàn)結(jié)核分支桿菌對異煙肼的耐藥機制涉及多個原因:KatG,inhA,kasA,oxyR-aphC和ndh基因.其中KatG基因和inhA基因是最重要的兩個基因.inhA基因全長807bp,它編碼NADH依賴的enoyl-?；d體蛋白(ACP)還原酶.inhA基因突變約

2、占異煙肼臨床耐藥菌株的10-35％,其突變位點呈多樣性.該研究采用限制性內(nèi)切酶消化與聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈多態(tài)構(gòu)象分析(PCR-SSCP)相結(jié)合的方法,對結(jié)核分枝桿菌臨床菌株inhA全基因突變進行檢測,從而得到完整的耐藥信息.方法:收集結(jié)核桿菌臨床菌株48株,其中異煙肼敏感株25株,耐藥23株.抽提結(jié)核桿菌DNA,從大腸桿菌pET-24b/inhA重組質(zhì)粒中抽提H37Rv inhA基因標準株DNA.以PCR方法擴增H37Rv、異煙肼耐藥株和

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