大鼠顱腦手術(shù)止血材料的應(yīng)用及其轉(zhuǎn)歸.pdf

1、目的:制作大鼠外傷后腦出血模型，在顱內(nèi)出血灶應(yīng)用止血材料（可吸收明膠海綿、Surgicel）進行止血，觀察止血材料在光鏡下、電鏡下的變化，以及應(yīng)用止血材料后出血部位腦組織的病理改變，腦細胞的凋亡情況。
　　 方法:
　　 1、大鼠外傷性腦出血模型的制作
　　 Wistar大鼠72只，雌雄不限，體重300-350克，隨機分為:
　　 ①對照組24只，手術(shù)后不應(yīng)用止血材料僅應(yīng)用棉片壓迫止血；
　　 ②

2、止血材料組48只，術(shù)后應(yīng)用止血材料止血，根據(jù)手術(shù)后應(yīng)用可吸收明膠海綿或Surgicel分為兩個小組，每組24只。
　　 對照組、明膠海綿組、Surgicel組根據(jù)處死時間（5天、10天、15天、20天、25天、30天）各分為六個亞組。每個亞組4只。
　　 將大鼠用10％水合氯醛腹腔麻醉后，縱行切開顱項皮膚，在右側(cè)頂骨（距矢狀縫，冠狀縫各5mm）處用牙科磨鉆仔細打磨出一直徑5mm的骨窗，保持硬膜的完整不受損。應(yīng)用外科3-0

3、帶線縫合針劃開硬膜，不觸及皮層，暴露腦組織，硬膜出血采用沾水棉片壓迫止血。應(yīng)用顯微取瘤鑷夾取大腦皮層范圍:2mm×2mm×1mm，造成外傷出血模型，按照分組應(yīng)用棉片壓迫、可吸收明膠海綿、Surgicel進行有效止血。完全止血后縫合傷口。術(shù)后大鼠正常進食，不能進食者給糖水灌胃。于5天，10天，15天，20天，25天，30天時分別處死各組4只大鼠。
　　 2、光鏡下觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及對照組的大鼠腦組織H-E染

4、色組織切片
　　 于5天，10天，15天，20天，25天，30天時分別處死各組2只大鼠，經(jīng)左心室-升主動脈插管，快速灌注生理鹽水150ml、4％多聚甲醛300ml（4℃，0.1M的PBS配制，PH7.4）先快后慢灌注2h，待大鼠四肢僵直后斷頭取腦。用4％多聚甲醛固定24小時以上。切取應(yīng)用止血材料部位的腦組織，常規(guī)酒精梯度脫水、透明、石蠟包埋，連續(xù)切片5μm。做蘇木精-伊紅(H-E)染色。采集圖像。
　　 3、透射電鏡及掃

5、描電鏡下觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及對照組的大鼠顱腦損傷切片
　　 于5天，10天，15天，20天，25天，30天時分別處死各組2只大鼠，經(jīng)左心室-升主動脈插管，快速灌注生理鹽水150ml、4％多聚甲醛300ml（4℃，0.1M的PBS配制，PH7.4）先快后慢灌注2h，斷頭取腦，切取應(yīng)用止血材料部位的大鼠腦組織，4％戊二醛固定24h，掃描電鏡標本制備為:3mm×3mm×1mm，1％鋨酸固定1h，經(jīng)酒精梯度脫水，真

6、空干燥，噴金鍍膜后采集圖像。透射電鏡標本制備為1mm×1mm×1mm，1％鋨酸固定1h，經(jīng)硬化標本制備，超薄切片，溶液成膜，復(fù)型成膜后采集圖像。
　　 4、觀察應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel及空白組的腦組織細胞凋亡改變
　　 每組隨機選取蠟塊固定的一個標本，經(jīng)過切片，脫水、水合，細胞通透，TUNEL反應(yīng)液作用，converter-POD作用，與底物DBA反應(yīng)顯色后在高倍鏡下隨機選取三個視野計數(shù)并拍照。
　　

7、 結(jié)果:
　　 1、光鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 在5d、10d、15d的腦組織切片H-E染色切片顯示:三個實驗組的出血灶炎癥反應(yīng)均明顯，周圍存在壞死破碎腦組織。單核細胞浸潤，紅細胞彌漫性存在于破碎的腦組織、止血材料間隙中。隨著時間的遷移，炎癥反應(yīng)逐漸減輕，單核細胞與紅細胞的數(shù)量減少。對照組可見神經(jīng)細胞水腫，大量單核細胞浸潤，局部可見紅細胞變形破碎。紅細胞破碎，釋放的血紅蛋白被氧化變成黃色。吸收

8、性明膠海綿與腦組織的貼附性較Surgicel差，炎癥反應(yīng)較重，并且占位空間也較大。實驗證實:Surgicel在與腦組織的組織相容性方面優(yōu)于可吸收明膠海綿。
　　 2、電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 2.1、掃描電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 出血部位腦組織可見明顯的腦水腫、軟化灶。水腫灶、軟化灶與正常部位腦組織界限較為明顯?？瞻捉M與Surgicel組在25天的標本可

9、見水腫程度較之前的標本減輕，而吸收性明膠海綿在25天的標本仍存在明顯的水腫。對照組可見腦組織破碎，出血灶腦組織參差不齊，腦水腫。少數(shù)出血灶仍可見未變形的紅細胞。在同一時間點可吸收明膠海綿仍可見明顯的顱內(nèi)占位效應(yīng)。Surgicel與腦組織的貼附性優(yōu)于比吸收性明膠海綿。隨著時間的進展腦水腫逐漸減輕。
　　 2.2、透射電鏡下創(chuàng)傷腦組織的病理改變與止血材料的吸收與轉(zhuǎn)歸
　　 術(shù)后5d腦組織的吞噬細胞吞噬大量變性壞死的神經(jīng)纖維。

10、術(shù)后15d與25d的神經(jīng)元在不同組別有所不同。對照組以神經(jīng)元細胞固縮、線粒體腫脹、高爾基體擴張、神經(jīng)纖維水腫為主。吸收性明膠海綿組中神經(jīng)元細胞腫脹較輕，部分線粒體空泡化、線粒體腫脹、高爾基體擴張。Surgicel組神經(jīng)元細胞胞漿水腫、神經(jīng)元突起水腫、線粒體腫脹、高爾基體擴張。
　　 3、應(yīng)用吸收性明膠海綿、Surgicel以及對照組實驗的腦組織凋亡改變陽性凋亡細胞在細胞膜上和胞質(zhì)中均出現(xiàn)棕黃色顆粒，結(jié)構(gòu)清晰，著色明顯高于背景，陰

11、性對照無棕色反應(yīng)，正常細胞或繁殖細胞核為藍色。測定凋亡的神經(jīng)細胞陽性細胞數(shù)分級和陽性細胞顯色強度分級，計算凋亡細胞的免疫組化評分（IHS值）進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)表明:
　　 ①止血方式不同時，各組IHS值存在明顯差異(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學(xué)意義，且任兩組相互比較均存在差異(P＜0.05)。
　　 ②當時間作為實驗的影響因素，各時間點的IHS值存在差異(P＜0.05)，任兩組進行比較時，除20d與25d標本的IHS值

12、無差異外，其余各時間點的IHS值均存在差異（P＜0.05）。
　　 ③當時間跟處理因素綜合考慮時，Surgicel止血后10d凋亡指數(shù)最高，空白組25天凋亡指數(shù)最低。
　　 ④并且時間與止血方式存在交互作用（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、作為神經(jīng)外科止血材料，Surgicel的組織相容性優(yōu)于吸收性明膠海綿。
　　 2、應(yīng)用止血材料會對細胞凋亡產(chǎn)生不同程度的影響。
　　 3、在保