輪狀病毒VP6蛋白在轉(zhuǎn)基因本生煙和甜菜中的表達(dá)和檢測.pdf

1、以驗(yàn)證使用BBSV-sVP6重組病毒這一策略在提高目標(biāo)蛋白(VP6)住轉(zhuǎn)基因本生煙中的表達(dá)量的效果為目的，在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，對轉(zhuǎn)BBSV-sVP6本生煙中的目的基因的整合和轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行了分子檢測。檢測結(jié)果證實(shí)了目標(biāo)基因在基因組水平上已經(jīng)穩(wěn)定整合，并啟動(dòng)了轉(zhuǎn)錄和翻譯。同時(shí)采用ELISA的方法，比較了基因組中穩(wěn)定整合了BBSV-sVP6基因的本生煙和基因組中穩(wěn)定整合了VP6基因本生煙之間目標(biāo)蛋白VP6的表達(dá)量差異，初

2、步證實(shí)在轉(zhuǎn)基因本生煙中BBSV-sVP6基因的表達(dá)量比VP6基因表達(dá)最提高了57％，提供了BBSV-sVP6策略可提高目標(biāo)蛋白表達(dá)量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 以獲得轉(zhuǎn)基因甜菜植株為目標(biāo)，在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，對甜菜不定根的發(fā)生條件進(jìn)行了較系統(tǒng)的比較研究，獲得了95株生根良好、移栽后存活的再生甜菜植株，經(jīng)PCR檢測，其中9株為陽生，完善了甜菜的遺傳轉(zhuǎn)化條件。 利用簡并引物，通過RT-PCR克隆獲得了TNV煙草分離物的全基因組序列