Ⅰ型膠原酶一步消化法高效、快速分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細胞及微囊化培養(yǎng)的研究.pdf

1、目的:尋求高效、快速體外分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細胞的方法;并探討微囊化人頭皮毛乳頭細胞體外培養(yǎng)及異體移植的可行性;同時對海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(APA)微囊與海藻酸鈉-BaCl2(BA)微囊的物理、生物性能進行評價。
　　方法:頭皮在真皮-皮下組織交界處剪開以獲得含有毛囊中下部的皮下脂肪。將含有毛囊中下部的皮下脂肪置于青霉素瓶中,用眼科剪剪成肉泥狀,加入膠原酶Ⅰ進行消化。當消化至真皮鞘較為松散但仍包裹毛乳頭時,以吸管機械吹打

2、幫助毛乳頭游離。通過沉淀、離心的方法,將毛乳頭與其它成分分離。最后,在顯微鏡下用移液器收集毛乳頭后進行培養(yǎng)。對毛乳頭貼壁率、細胞遷出時間、工作強度、污染機會與顯微解剖法、顯微解剖加酶消化法進行比較。細胞培養(yǎng)成功后,取4-6代細胞進行實驗。在高壓電場微囊發(fā)生器作用下,將人頭皮毛乳頭細胞分別用APA微囊與BA微囊包裹。將微囊化的細胞進行體外培養(yǎng)和異體移植,觀察微囊化細胞在體外及異體內(nèi)的存活情況,并對兩種微囊的生物相容性、機械強度、免疫隔離效

3、果及微囊內(nèi)細胞活性進行比較。
　　結(jié)果:“Ⅰ型膠原酶一步消化法”分離一個毛乳頭平均的顯微鏡下工作時間為15秒,污染率為0％,與顯微解剖法及顯微解剖加酶消化法比較,顯著降低了工作強度和污染機會。其所需要的顯微技術僅僅是在顯微鏡下用移液器將毛乳頭吸出,大大降低了操作難度。同時,該法保留了顯微解剖加酶消化法促進毛乳頭貼壁和細胞遷出的優(yōu)點。在微囊的相互比較方面,APA微囊生物相容性優(yōu)于BA微囊(P<0.01),但機械強度低于BA微囊(P<