電針調(diào)節(jié)Ras-RaF-MEK1-2-ERK1-2信號(hào)通路抑制軟骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討電針調(diào)節(jié)Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信號(hào)通路抑制軟骨細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.基于國(guó)內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)，以電針干預(yù)骨性關(guān)節(jié)炎的文獻(xiàn)為研究對(duì)象，采用綜合-分析-歸納的方法，探討電針調(diào)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞功能改變相關(guān)信號(hào)通路及調(diào)控因子的可能作用機(jī)制。
　　2.清潔級(jí)4周齡SD大鼠，采用機(jī)械-Ⅱ型膠原酶消化法獲取膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，并用TNF-α誘導(dǎo)建立軟骨細(xì)胞的凋亡模型，倒置相差

2、顯微鏡觀察軟骨細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，Ⅱ型膠原免疫組化鑒定軟骨細(xì)胞，MTT檢測(cè)軟骨細(xì)胞的活性，DAPI檢測(cè)軟骨細(xì)胞的凋亡情況。
　　3.SD鼠30只，分為空白組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，電針干預(yù)后，制備電針后血清。培養(yǎng)第2代軟骨細(xì)胞，采用10％空白組血清培養(yǎng);模型組，采用TNF-α20μg/L+10％空白組血清;對(duì)照組，采用TNF-α20μg/L+10％對(duì)照組血清;實(shí)驗(yàn)組，采用TNF-α20μg/L+10％電針后血清，干預(yù)48 h后，DAPI染色

3、檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡率，MTT檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞的活性，Western Blot檢測(cè)Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.電針通過調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞的增殖、分化及凋亡相關(guān)信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)控因子表達(dá)，參與軟骨細(xì)胞功能的調(diào)控，從而延緩軟骨退變。電針治療骨性關(guān)節(jié)炎具有多途徑、多靶點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)。
　　2.體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞，Ⅱ型膠原免疫組化染色可見胞漿呈棕黃色，為陽性細(xì)胞。各組干預(yù)48 h，軟骨細(xì)胞凋亡

4、率，TNF-α10μg/L、20μg/L、30μg/L明顯高于0μg/L（P＜0.01），TNF-α40μg/L明顯高于10μg/L(P＜0.01);軟骨細(xì)胞活性，TNF-α10μg/L、20μg/L、40μg/L明顯低于0μg/L(P＜0.01)，TNF-α20μg/L明顯低于10μg/L（P＜0.05），TNF-α40μg/L明顯低于10μg/L(P＜0.01)、20μg/L(P＜0.05)。
　　3.電針后血清，能明顯改善T

5、NF-α誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞的狀態(tài)，抑制軟骨細(xì)胞凋亡，提高軟骨細(xì)胞活性，與模型組相比(P＜0.05)。電針后血清，具有不同程度的抑制TNF-α誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞中Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2蛋白的表達(dá)，與模型組相比(P＜0.01，P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.TNF-α20μg/L能成功建立軟骨細(xì)胞的凋亡模型。
　　2.電針后血清通過調(diào)節(jié)Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信號(hào)通路，抑制TNF-α誘導(dǎo)軟骨