多重PCR方法快速檢測(cè)血流感染患者血培養(yǎng)標(biāo)本中主要革蘭陰性桿菌方法的建立.pdf

1、目的:
　　建立可同時(shí)快速檢測(cè)血流感染患者血培養(yǎng)中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌3種主要革蘭陰性桿菌的多重PCR方法。
　　方法：
　　回顧性分析福建省立院2014年1月份-2014年6月份202份血流感染患者血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中主要革蘭陰性桿菌的分布情況；通過查找比對(duì)GenBank公布的大腸埃希菌O83:H1基因（NC-017634）、肺炎克雷伯桿菌 HS11286基因（NC-016845）、鮑曼不動(dòng)桿菌Oxa基

2、因（NC-009085），基因保守區(qū)設(shè)計(jì)各細(xì)菌的特異性引物。采用設(shè)計(jì)的3對(duì)細(xì)菌特異性引物，用已知標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行血培養(yǎng)，提取血培養(yǎng)瓶中的細(xì)菌DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，建立多重PCR方法；用建立的多重PCR方法檢測(cè)上述202份革蘭陰性桿菌的血培養(yǎng)標(biāo)本，鑒定結(jié)果與傳統(tǒng)血培養(yǎng)鑒定結(jié)果進(jìn)行配對(duì)ⅹ2檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　血流感染患者血培養(yǎng)陽性標(biāo)本排在前3位的革蘭陰性桿菌為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌，所占比例分別為33.66％、2

3、1.78%、15.35%；建立的多重PCR方法，可擴(kuò)增出相應(yīng)的病原體基因，經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳，在特定位置顯示相應(yīng)目的條帶，特異性強(qiáng)；用傳統(tǒng)鑒定方法和多重PCR方法檢測(cè)202份標(biāo)本，P=0.125>0.01,一致性檢驗(yàn) Kappa=0.953，靈敏度為97.2%，特異度為100%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果兩種方法無差異。
　　結(jié)論：
　　建立了可同時(shí)快速檢測(cè)血流感染患者血培養(yǎng)標(biāo)本中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動(dòng)桿菌的多重PCR方法，耗時(shí)3