瘦素誘導(dǎo)心肌細胞肥大作用機制及內(nèi)源性腎上腺糖皮質(zhì)激素對血管炎癥反應(yīng)抑制作用研究.pdf

1、第一部分瘦素誘導(dǎo)心肌細胞肥大作用機制 目的： 瘦素(Leptin)是一種肥胖基因(ob gene)編碼的蛋白質(zhì)，近年來的研究資料顯示，肥胖病人血漿的Leptin濃度明顯增高，血漿Leptin濃度與心肌肥厚程度密切相關(guān)。目前認為，Leptin在肥胖相關(guān)心血管疾病中發(fā)揮著重要作用。研究已經(jīng)證實，Leptin能誘導(dǎo)心肌細胞內(nèi)氧活性物質(zhì)(ROS)的增加和ROS依賴的心肌細胞肥大，內(nèi)皮素-1(ET-1)受體通路參與該過程，但是由于

2、ET-1受體阻斷劑并未能完全阻斷Leptin的作用，說明仍有其他途徑參與其中。Leptin能激活過氧化物增生因子活化受體α(PPARα)，通過激活脂肪組織的PPARα而影響脂肪酸的轉(zhuǎn)運和氧化代謝，目前有研究顯示，PPARα的過度表達可以造成小鼠的心肌肥厚，但PPARα活化是否涉及瘦素誘導(dǎo)的心肌細胞肥大仍不清楚。本課題主要探討在瘦素誘導(dǎo)心肌細胞肥大的過程中PPARα所發(fā)揮的作用。 方法： 選用原代培養(yǎng)的新生SD乳鼠心肌細胞

3、。細胞內(nèi)熒光信號用熒光倒置顯微鏡檢測。用ROS敏感的熒光探針2，7-dichloronuorescin dictate(DCF-DA)反映細胞內(nèi)ROS水平；用RNA敏感的熒光探針碘化丙叮(PI)檢測細胞內(nèi)RNA含量；用考馬斯亮蘭法檢測細胞內(nèi)總蛋白含量。采用熒光定量PCR法檢測心肌細胞內(nèi)PPARα mRNA表達的變化，Western-blot法檢測心肌細胞PPARα蛋白表達的變化。 結(jié)論： Leptin能夠劑量依賴性的誘導(dǎo)

4、心肌細胞內(nèi)PPARα mRNA和蛋白表達增加；PPARα拮抗劑可以抑制Leptin誘導(dǎo)的心肌細胞內(nèi)ROS含量增加和心肌細胞肥大；PPARα的活化在Leptin誘導(dǎo)的心肌細胞內(nèi)ROS含量增加和心肌細胞肥大的過程中發(fā)揮重要的介導(dǎo)作用。 第二部分內(nèi)源性腎上腺糖皮質(zhì)激素對內(nèi)毒素誘導(dǎo)的血管炎癥反應(yīng)抑制作用研究 目的: 血管內(nèi)皮的損傷與多種心血管疾病相關(guān)，是心血管疾病的獨立危險因素。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)已被確認為血管內(nèi)皮細胞損

5、傷的重要機制，但目前對內(nèi)源性抗炎系統(tǒng)在炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用認識還處于初級階段。本實驗研究目的是探討生理水平腎上腺糖皮質(zhì)激素對血管炎癥反應(yīng)的抑制作用。 方法： 本實驗分體內(nèi)試驗和體外試驗兩部分。(1)體外試驗：原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)，經(jīng)形態(tài)學(xué)和免疫組化鑒定后，用第3-5代進行試驗。分別給予0-80 μg/ml等不同濃度的脂多糖(LPS)作用內(nèi)皮細胞2小時，收集細胞上清液；同時用10 μg/ml刺激細胞，分別在

6、0、30分鐘、1小時、2小時、4小時、8小時等6個時間點收集細胞上清液，用ELISA法檢測TNF-α含量。(2)體內(nèi)試驗：將180-220 g正常SD大鼠分為三大組，分別給予不同濃度的RU486(腎上腺糖皮質(zhì)激素拮抗劑)、不同濃度的TSA(HDAC抑制劑)和摘除雙側(cè)腎上腺處理后，以1 mg/kg腹腔注射LPS，作用1小時，取大鼠胸主動脈提取組織蛋白，ELISA法檢測TNF-α含量。 結(jié)論： 分別阻斷糖皮質(zhì)激素受體、抑制H