RNA干擾沉默急性白血病SUV39H1基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)干擾人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株KG-1的SUV39H1(suppressor of variegation3-9 homolog1)基因的表達(dá)，研究SUV39H1基因干擾對(duì)KG-1細(xì)胞增殖和凋亡以及對(duì)組蛋白甲基化、乙酰化修飾的影響，探尋白血病基因治療的新靶點(diǎn)。
　　方法：(1)采用RT-PCR的方法，將已篩選出的針對(duì)SUV39H1基因的最佳小干擾RNA片

2、段經(jīng)LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染KG-1細(xì)胞后，觀察基因沉默效益。（2）應(yīng)用MTS法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，觀察SUV39H1 siRNA對(duì)KG-1細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的凋亡。（3）Western blot檢測(cè)SUV39H1 siRNA作用后凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3、C-myc及細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白P15表達(dá)水平的變化、組蛋白H3K9甲基化及組蛋白H3、H

3、4乙?；?，H3K9、H3K14、H3K27乙?；癄顟B(tài)的變化。
　　結(jié)果：（1）轉(zhuǎn)染6小時(shí)后，轉(zhuǎn)染效率達(dá)(75±2.64)％，最佳的小干擾片段序列為sense5'-CGUGGAUUGUCUCAGGGAATT-3'；antisense5'-UUCCCU GAGACAAUCCACGTG-3'。SUV39H1 siRNA轉(zhuǎn)染 KG-1細(xì)胞后可沉默該基因表達(dá)，并呈現(xiàn)濃度依賴性。（2）SUV39 H1基因沉默可上調(diào) P15的表達(dá)，抑制KG-1

4、細(xì)胞的增殖，48小時(shí)半數(shù)抑制濃度（IC50）約為60nM。（3）SUV39H1 siRNA致KG-1細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、c-myc、procaspase-9、procaspase-3的表達(dá)下降，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，隨著濃度的增加，凋亡率逐漸上升。（4）SUV39H1 siRNA抑制KG-1細(xì)胞的SUV39H1蛋白及SUV39H1 mRNA表達(dá)，組蛋白H3K9甲基化水平下調(diào)，組蛋白H3、H3K9的乙酰化水平上調(diào)，組蛋白H4、H3K14、

5、H3K27的乙?；綗o(wú)顯著變化。
　　結(jié)論：（1）LipofectamineTM2000脂質(zhì)體介導(dǎo)SUV39H1 siRNA導(dǎo)入KG-1細(xì)胞具有轉(zhuǎn)染率高、方法簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。（2）運(yùn)用RNAi技術(shù)，SUV39H1 siRNA可以有效地干擾KG-1細(xì)胞中SUV39H1的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使得SUV39H1有望成為白血病治療的新靶點(diǎn)。（3）SUV39H1 siRNA能夠下調(diào)組蛋白H3K9甲基化，上調(diào)組蛋白H3乙?；癏