RNA干擾沉默急性白血病SUV39H1基因表達的實驗研究.pdf

1、目的：應用小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)干擾人急性髓細胞白血病細胞株KG-1的SUV39H1(suppressor of variegation3-9 homolog1)基因的表達，研究SUV39H1基因干擾對KG-1細胞增殖和凋亡以及對組蛋白甲基化、乙酰化修飾的影響，探尋白血病基因治療的新靶點。
　　方法：(1)采用RT-PCR的方法，將已篩選出的針對SUV39H1基因的最佳小干擾RNA片

2、段經(jīng)LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染KG-1細胞后，觀察基因沉默效益。（2）應用MTS法繪制細胞生長曲線，觀察SUV39H1 siRNA對KG-1細胞增殖的影響；流式細胞術分析細胞的凋亡。（3）Western blot檢測SUV39H1 siRNA作用后凋亡相關蛋白Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3、C-myc及細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白P15表達水平的變化、組蛋白H3K9甲基化及組蛋白H3、H

3、4乙酰化，H3K9、H3K14、H3K27乙酰化狀態(tài)的變化。
　　結果：（1）轉(zhuǎn)染6小時后，轉(zhuǎn)染效率達(75±2.64)％，最佳的小干擾片段序列為sense5'-CGUGGAUUGUCUCAGGGAATT-3'；antisense5'-UUCCCU GAGACAAUCCACGTG-3'。SUV39H1 siRNA轉(zhuǎn)染 KG-1細胞后可沉默該基因表達，并呈現(xiàn)濃度依賴性。（2）SUV39 H1基因沉默可上調(diào) P15的表達，抑制KG-1

4、細胞的增殖，48小時半數(shù)抑制濃度（IC50）約為60nM。（3）SUV39H1 siRNA致KG-1細胞凋亡相關蛋白Bcl-2、c-myc、procaspase-9、procaspase-3的表達下降，出現(xiàn)細胞凋亡，隨著濃度的增加，凋亡率逐漸上升。（4）SUV39H1 siRNA抑制KG-1細胞的SUV39H1蛋白及SUV39H1 mRNA表達，組蛋白H3K9甲基化水平下調(diào)，組蛋白H3、H3K9的乙酰化水平上調(diào)，組蛋白H4、H3K14、

5、H3K27的乙?；綗o顯著變化。
　　結論：（1）LipofectamineTM2000脂質(zhì)體介導SUV39H1 siRNA導入KG-1細胞具有轉(zhuǎn)染率高、方法簡便等特點。（2）運用RNAi技術，SUV39H1 siRNA可以有效地干擾KG-1細胞中SUV39H1的表達，抑制細胞增殖，并誘導細胞凋亡，使得SUV39H1有望成為白血病治療的新靶點。（3）SUV39H1 siRNA能夠下調(diào)組蛋白H3K9甲基化，上調(diào)組蛋白H3乙?；癏