重組腺病毒介導(dǎo)反義C-myc基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞治療的有效性及安全性研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文重組腺病毒介導(dǎo)反義C-myc基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞治療的有效性及安全性研究姓名：余昌中申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：人體解剖學(xué)指導(dǎo)教師：應(yīng)大君2001.5.1因在肝臟細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)移。但是，腺病毒載體介導(dǎo)的肝癌基因治療的真正應(yīng)用于臨床，還必需解決臨床安全性問(wèn)題，即其臨床使用對(duì)機(jī)體的毒副作用。因此臨床應(yīng)用前對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)至關(guān)重要一；，，≈ 櫪究采用免疫組化法，以檢測(cè)c - m y c 、b e l - 2 癌基因在肝癌組織中

2、表達(dá)情況，探討其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其在判斷預(yù)后中的價(jià)值。采用構(gòu)建成功的A d - A S m y c ，利用反義基因在翻譯水平上阻斷c - m y c 的過(guò)表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)并促使其凋亡，以尋找肝癌基因治療新的有效方法。經(jīng)B e a g l e 犬肝動(dòng)脈、門(mén)靜脈途徑注射重組腺病毒介導(dǎo)反義c ．m y c基因( A d ．A S m y c ) 載體，觀測(cè)其在體內(nèi)是否能有效轉(zhuǎn)導(dǎo)入正常肝細(xì)胞、持續(xù)時(shí)間、體內(nèi)器官分布及毒副作用，以

3、評(píng)價(jià)A d - A S m y c 治療肝癌的臨床前期安全性。／本研究獲得以下主要結(jié)果：、1 ．原發(fā)性肝癌組織中c - m y c 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率較高，B c l ．2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率雖然較低，但其陽(yáng)性表達(dá)往往伴隨著c - m y c 蛋白陽(yáng)性表達(dá)，二者聯(lián)合檢鋇4 有助于判斷肝癌的惡性程度及預(yù)后。2 ．重組腺病毒介導(dǎo)的反義c ．m y c 基因( A d - A S m y c ) 滴度較高，可達(dá)到5 ×1 0 ”P(pán) F U

4、／m l ，并可高效轉(zhuǎn)導(dǎo)入4 種人肝癌細(xì)胞系( B E L ．7 4 0 2 、Q S G ．7 7 0 1 、S M M C - 7 7 2 1 、H C C ．9 2 0 4 ) 、人胚1 1 , - 倍體細(xì)胞2 B S 及正常人肝細(xì)胞L 0 2 細(xì)胞。3 ．A d ．A S m y c 能夠引起人肝癌細(xì)胞c - m y c 、b c l ．2R N A 及c ．m y c 、b c l ．2蛋白表達(dá)下調(diào)，抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和導(dǎo)致肝癌

5、細(xì)胞凋亡。4 ．c ．m y c 表達(dá)水平不同的肝癌細(xì)胞系，A d ．A S m y e 的作用效果不同，與細(xì)胞c - m y c 表達(dá)水平高低有關(guān)，c ．m y c 表達(dá)高者治療效果更明顯。說(shuō)明反義c ．m y c 基因療法對(duì)不同的細(xì)胞類(lèi)型治療效果有差異性。5 ．通過(guò)兩種肝癌細(xì)胞系( B E L ．7 4 0 2 、S M M C ．7 7 2 1 ) 裸鼠皮下移植瘤的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，瘤內(nèi)直接注射A d - A S m y c 治療裸鼠