重組腺病毒介導反義C-myc基因對人肝癌細胞治療的有效性及安全性研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文重組腺病毒介導反義C-myc基因對人肝癌細胞治療的有效性及安全性研究姓名：余昌中申請學位級別：博士專業(yè)：人體解剖學指導教師：應大君2001.5.1因在肝臟細胞的高效轉移。但是，腺病毒載體介導的肝癌基因治療的真正應用于臨床，還必需解決臨床安全性問題，即其臨床使用對機體的毒副作用。因此臨床應用前對其安全性進行評價至關重要一；，，≈ 櫪究采用免疫組化法，以檢測c - m y c 、b e l - 2 癌基因在肝癌組織中

2、表達情況，探討其在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其在判斷預后中的價值。采用構建成功的A d - A S m y c ，利用反義基因在翻譯水平上阻斷c - m y c 的過表達，抑制肝癌細胞的生長并促使其凋亡，以尋找肝癌基因治療新的有效方法。經B e a g l e 犬肝動脈、門靜脈途徑注射重組腺病毒介導反義c ．m y c基因( A d ．A S m y c ) 載體，觀測其在體內是否能有效轉導入正常肝細胞、持續(xù)時間、體內器官分布及毒副作用，以

3、評價A d - A S m y c 治療肝癌的臨床前期安全性。／本研究獲得以下主要結果：、1 ．原發(fā)性肝癌組織中c - m y c 蛋白陽性表達率較高，B c l ．2 蛋白陽性表達率雖然較低，但其陽性表達往往伴隨著c - m y c 蛋白陽性表達，二者聯(lián)合檢鋇4 有助于判斷肝癌的惡性程度及預后。2 ．重組腺病毒介導的反義c ．m y c 基因( A d - A S m y c ) 滴度較高，可達到5 ×1 0 ”P F U

4、／m l ，并可高效轉導入4 種人肝癌細胞系( B E L ．7 4 0 2 、Q S G ．7 7 0 1 、S M M C - 7 7 2 1 、H C C ．9 2 0 4 ) 、人胚1 1 , - 倍體細胞2 B S 及正常人肝細胞L 0 2 細胞。3 ．A d ．A S m y c 能夠引起人肝癌細胞c - m y c 、b c l ．2R N A 及c ．m y c 、b c l ．2蛋白表達下調，抑制肝癌細胞生長和導致肝癌

5、細胞凋亡。4 ．c ．m y c 表達水平不同的肝癌細胞系，A d ．A S m y e 的作用效果不同，與細胞c - m y c 表達水平高低有關，c ．m y c 表達高者治療效果更明顯。說明反義c ．m y c 基因療法對不同的細胞類型治療效果有差異性。5 ．通過兩種肝癌細胞系( B E L ．7 4 0 2 、S M M C ．7 7 2 1 ) 裸鼠皮下移植瘤的體內實驗證實，瘤內直接注射A d - A S m y c 治療裸鼠