α-,2--腎上腺素受體參與調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞功能的研究.pdf

1、目的：實(shí)驗(yàn)室以前的研究已從功能上說(shuō)明淋巴細(xì)胞存在α一和β一腎上腺素受體，這些受體參與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的功能。但目前還沒(méi)有直接的證據(jù)說(shuō)明淋巴細(xì)胞表達(dá)和合成α～腎上腺素受體(a-AR)，且α一亞型腎上腺素受體在調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞功能中的介導(dǎo)作用目前還知之甚少。因此，本研究首先從分子水平揭示T淋巴細(xì)胞表達(dá)兩種亞型a-AR一一αl和ct2-ARmRNA的現(xiàn)象，然后探討這些受體在調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞功能中的介導(dǎo)作用及其相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，從而為神經(jīng)一內(nèi)分泌

2、一免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：取大鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞，用尼龍毛柱粘附法分離和純化T淋巴細(xì)胞，應(yīng)用E花環(huán)法檢測(cè)T細(xì)胞的分離純度。用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)靜息T細(xì)胞和活化T細(xì)胞的a-ARmRNA的表達(dá)。用α1-AR激動(dòng)劑苯腎上腺素、a2-AR激動(dòng)劑可樂(lè)定、a2-AR拮抗劑育亨賓、磷脂酶C(PLC)抑制劑U-73122和蛋白激酶C(PKC)抑制劑Chelerythrine分別作用于淋巴細(xì)胞，然后應(yīng)用噻唑

3、蘭(MTT)比色法檢測(cè)這些淋巴細(xì)胞對(duì)刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖反應(yīng)；并應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法測(cè)定用ConA刺激的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中白介素一4(IL-4)的水平。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)對(duì)腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的分離和純化，獲得的T細(xì)胞的純度明顯高于未分離和純化的淋巴細(xì)胞，但分離純化后的T細(xì)胞，其活性仍然保持與分離前T細(xì)胞的活性相似。這些純化的T細(xì)胞在靜息狀態(tài)時(shí)可表達(dá)al-ARmRNA和a2-ARmRNA，但T細(xì)胞用ConA

4、刺激后，表達(dá)αrARmRNA和a2-ARmRNA都明顯高于靜息的淋巴細(xì)胞。本研究所用的4個(gè)濃度的al-AR激動(dòng)劑苯腎上腺素(10-9～10-6mol／L)均沒(méi)有顯著影響ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)；而同樣4個(gè)濃度的a2-AR激動(dòng)劑可樂(lè)定(10-9～10‘6mol／n)均可明顯抑制ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，但各濃度之間沒(méi)有顯著差異。不同濃度的cz2-AR拮抗劑育亨賓(10-10～10。5mol／L)都能阻斷可樂(lè)定(10-9mol／

5、L或10-6mol／L)的抑制T細(xì)胞增殖的作用。同樣，不同濃度的PLC抑制劑U-73122(10-10～10。7mol／L)和PKC抑制劑chelerythrine(10-10～10‘7mol／L)都可阻斷可樂(lè)定(10’9mol／L或10。6mol／L)的抑制T細(xì)胞增殖的作用。此外，可樂(lè)定(10-9mol／L)可抑制ConA誘導(dǎo)的T細(xì)胞產(chǎn)生和釋放細(xì)胞因子IL-4，而育亨賓(10-9mol／L)、U-73122(10-9mol／L)和ch

6、elerythrine(10。9mol／L)均能阻斷可樂(lè)定的抑制IL-4產(chǎn)生和釋放的作用。 結(jié)論：T淋巴細(xì)胞能表達(dá)兩種α亞型腎上腺素受體一一α1’AR和僅2一AR，并且活化的T細(xì)胞表達(dá)α1．AR和僅2一AR均增強(qiáng)。αl—AR可能不參與調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)；而α2一AR可抑制T淋巴細(xì)胞的功能，這種作用可能經(jīng)淋巴細(xì)胞內(nèi)的PLC和PKC路徑實(shí)現(xiàn)。上述結(jié)果提示，在機(jī)體內(nèi)，交感神經(jīng)和腎上腺髓質(zhì)所釋放的去甲腎上腺素和腎上腺素有可能通過(guò)α