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1、CD40配體(CD40ligand，CD40L)通過與其受體CD40的相互作用在T細(xì)胞依賴的體液和細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要的作用。本實(shí)驗(yàn)克隆了CD40L胞外功能區(qū)(E107-L261)基因，并在其N端融合了異亮氨酸拉鏈(isoleucinezipper，IZ)促使其形成三聚體活性形式，同時(shí)為了后期純化的需要，在IZ的N端融合6個(gè)His，將所融合得到的IZ-CD40L克隆進(jìn)入pET30a表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)表達(dá)體系進(jìn)行誘導(dǎo)表
2、達(dá)。結(jié)果表明，重組蛋白IZ-CD40L以包涵體形式在大腸桿菌(BL21)中得到較高水平的表達(dá)。通過蛋白的變性、復(fù)性和HiTrapTM親和層析獲得了純度達(dá)95％以上的IZ-CD40L重組蛋白。經(jīng)凝膠過濾層析和非還原SDS-PAGE分析，驗(yàn)證了其確系三聚體形式。激光共聚焦實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，重組蛋白IZ-CD40L可與多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株XG2表面CD40分子結(jié)合，并促使其在膜表面發(fā)生聚集。體外活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，重組蛋白IZ-CD40L可有效促使D
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