HMGA2在Wnt-β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)的散發(fā)性大腸管狀腺瘤癌變過(guò)程中的作用.pdf

1、大腸腺瘤是一種臨床較常見(jiàn)的具有癌變潛能的大腸良性病變，其組織學(xué)類(lèi)型以管狀腺瘤最為常見(jiàn)。研究表明，大腸腺瘤被認(rèn)為是大腸癌主要的癌前病變，80％以上的大腸癌是發(fā)生在先存的腺瘤基礎(chǔ)上?！罢４竽c上皮-腺瘤-腺癌”的發(fā)病路徑已被公認(rèn)為是經(jīng)典的大腸癌發(fā)病過(guò)程。但是大腸腺瘤癌變是一個(gè)多基因改變、多階段綜合作用累積的復(fù)雜過(guò)程，其確切機(jī)制仍不明確。因此對(duì)大腸腺瘤癌變機(jī)制的研究對(duì)于大腸癌的預(yù)防具有重要意義。
　　Wnt/β-catenin是經(jīng)典Wn

2、t信號(hào)通路途徑，在胚胎發(fā)育及多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程起著重要的作用。目前，已經(jīng)公認(rèn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路是大腸腺瘤癌變過(guò)程中的關(guān)鍵信號(hào)通路之一，該通路的異常激活可以介導(dǎo)大腸腺瘤的癌變。分泌性Wnt蛋白是該途徑的啟動(dòng)因子，其中Wnt2和Wnt5a主要在胃腸道腫瘤中表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞受到損傷因素的作用后，Wnt信號(hào)結(jié)合到卷曲蛋白胞外區(qū)，將胞質(zhì)中Dsh蛋白募集至胞膜下，使Dsh活化從而抑制由Axin、APC和GSK-3β組成的復(fù)合物活性

3、，導(dǎo)致β-catenin不能被GSK-3β磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致β-catenin不能被降解，致使大量游離的β-catenin聚集在胞質(zhì)中，隨后進(jìn)入胞核與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活其轉(zhuǎn)錄活性，啟動(dòng)一系列下游靶分子如c-myc、CDK4、CyclinD1、VEGF等，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生。β-catenin是Wnt信號(hào)通路的核心分子，信號(hào)通路激活的關(guān)鍵在于β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中累積以及其與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF的結(jié)合。Wnt、β-cat

4、enin、CDK4、CyclinD1是Wnt/β-catenin信號(hào)通路的重要組成成分，它們參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞分化及調(diào)控細(xì)胞周期，起著重要作用。
　　高遷移率蛋白(HMGA2)是一種構(gòu)架轉(zhuǎn)錄因子，普遍存在于真核生物中，其自身缺乏轉(zhuǎn)錄活性，但含有三個(gè)特殊的AT鉤結(jié)構(gòu)，這些AT鉤結(jié)構(gòu)可以結(jié)合到富集AT序列的染色質(zhì)上，改變基因的DNA構(gòu)象，或者直接與相關(guān)蛋白發(fā)生作用，繼而增強(qiáng)或者抑制這些基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而影響胚胎形成、組織發(fā)育

5、，引起腫瘤的發(fā)生。HMGA2在分化成熟組織中很少表達(dá)或幾乎不表達(dá)，而在胚胎期以及不成熟組織中大量表達(dá)。近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)，HMGA2在多種惡性腫瘤組織中出現(xiàn)異常表達(dá)，如肺癌、白血病、卵巢癌、大腸癌、甲狀腺癌、胃癌、胰腺癌等，這些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展均與HMGA2基因異常表達(dá)有關(guān)，被認(rèn)為是一個(gè)潛在的腫瘤分子標(biāo)志物。但目前有關(guān)HMGA2在在散發(fā)性大腸管狀腺瘤癌變過(guò)程中所起的確切作用及機(jī)制，尚缺乏系統(tǒng)性地研究。
　　研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，HMGA2

6、與TCFs家族中的TCF/LEF有一定的相似結(jié)構(gòu)域，即含有HMG的DNA結(jié)合域，它能夠增強(qiáng)β-catenin與TCF/LEF結(jié)合的轉(zhuǎn)錄活性，與Wnt/β-catenin信號(hào)通路關(guān)系密切。有研究表明HMGA2在轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺癌中可能受Wnt10b/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控而影響腫瘤的增殖;在胃癌中HMGA2的異常表達(dá)可能會(huì)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，從而促進(jìn)EMT的進(jìn)程。二者之間可能存在相互調(diào)控的作用。因此，鑒于Wnt/

7、β-catenin信號(hào)通路在大腸腺瘤癌變中的重要作用以及HMGA2與Wnt/β-catenin信號(hào)通路之間可能存在的相互調(diào)控作用，使得我們思考一個(gè)問(wèn)題:HMGA2和Wnt/β-catenin信號(hào)通路是否共同參與調(diào)控散發(fā)性大腸管狀腺瘤的癌變以及它們之間發(fā)揮怎樣的調(diào)控作用，目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)第一部分首先選取大腸癌細(xì)胞株，采用siRNA技術(shù)、Realtime-PCR及Western blot方法，探討HMGA2與經(jīng)典