受體血清預(yù)處理供肝對(duì)異種肝移植HAR抑制作用的研究.pdf

1、[目的]
　　 異種肝移植是解決臨床肝源匱乏的途徑之一,而超急性排斥反應(yīng)(hyperacuterejection,HAR)是異種肝移植(xenogeneic liver transplantation)首先面臨的關(guān)鍵問(wèn)題,在臨床同種異體肝移植中亦偶有報(bào)道。抑制HAR的發(fā)生,具有較重要的現(xiàn)實(shí)意義。為此,復(fù)制豚鼠至大鼠非協(xié)調(diào)性異種原位肝移植模型,與穩(wěn)定的同種異體大鼠原位肝移植對(duì)照,以建立一種穩(wěn)定的異種原位肝移植模型;在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一

2、步觀察受體血清預(yù)處理供肝及聯(lián)合應(yīng)用眼鏡蛇毒因子(cobra vene factor,CVF)對(duì)異種肝移植HAR的影響,以探討受體血清(recipient serum,RS)預(yù)處理供肝對(duì)異種肝移植HAR作用的可能機(jī)制及預(yù)防HAR的方法,為臨床肝移植預(yù)防排斥反應(yīng)提供新的思路。
　　 [方法]
　　 1.實(shí)驗(yàn)組:即異種肝原位移植組,取健康清潔豚鼠(雌雄不限)和SD大鼠(雄性),各10只分別作為供體和受體,隨機(jī)配對(duì),采用“二袖套

3、法”(two cufftechnique)進(jìn)行豚鼠至大鼠原位肝移植。
　　 對(duì)照組:即同種肝原位移植組,取SD大鼠10只(雌雄不限)作為供體,雄性SD大鼠10只作為受體,隨機(jī)配對(duì),采用“二袖套法”進(jìn)行大鼠至大鼠原位肝移植。
　　 觀察兩組手術(shù)成功率、無(wú)肝期、手術(shù)時(shí)間和受體存活時(shí)間。
　　 2.取健康清潔豚鼠和大鼠,各69只,隨機(jī)配對(duì)并分為三組(n=23)。
　　 按處理方式分為A組(對(duì)照組,供肝切取后以肝

4、素生理鹽水灌注預(yù)處理供肝)、B組(供肝切取后以0.5％受體血清灌注預(yù)處理供肝)和C組(術(shù)前受體靜注CVF+供肝切取后以0.5%受體血清灌注預(yù)處理供肝),按上述“二袖套法”進(jìn)行豚鼠至大鼠原位肝移植。
　　 觀察各組受體存活時(shí)間、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)值的改變、移植肝組織學(xué)改變及抗體IgG和補(bǔ)體C3的表達(dá)情況。
　　 [結(jié)果]
　　 1.豚鼠至大鼠異種原位肝移植模型復(fù)制成功,相關(guān)指標(biāo)如下:手術(shù)成功率:對(duì)照組為90%

5、(9/10),實(shí)驗(yàn)組為80%(8/10)。無(wú)肝期:對(duì)照組為(20.7±2.1)min,實(shí)驗(yàn)組為(21.5±2.1)min。手術(shù)時(shí)間:對(duì)照組為(69.8±16.7)min,實(shí)驗(yàn)組為(72.0±16.9)min。以上各項(xiàng)二者比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對(duì)照組8只受體存活超過(guò)1W,實(shí)驗(yàn)組受體存活約1h,有顯著性差異。
　　 2.受體存活時(shí)間:A組為(45.20±16.29)min,B組為(88.05±25.54)min,

6、C組(161.52±4.47.91)min,三組兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)值:A組為(126.01±23.29)U/L,B組為(106.06±19.02)U/L,C組為(81.16±14.96)U/L,三組兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 移植肝病理:表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹,水樣變性,肝血竇和血管擴(kuò)張瘀血,但B組和C組較A組明顯減輕。
　　 免疫組化結(jié)

7、果:可見(jiàn)IgG和補(bǔ)體C3在肝組織內(nèi)在表達(dá),各組積分光密度(IOD)值的比較,在IgG表達(dá)中,A、B、C組分別為(9.38±1.22)×104、(6.79±1.07)×104和(9.38±1.22)×104,A組與B、C組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05),但B、C組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);在C3表達(dá)中,A、B、C組IOD(integral optical density,IOD)值分別為(7.44±1.36)×104、

8、(6.17±0.98)x104和(3.53±0.69)×104,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.在大鼠至大鼠同種原位肝移植基礎(chǔ)之上建立豚鼠至大鼠異種原位肝移植模型,操作簡(jiǎn)便,模型穩(wěn)定,成功率高,可用于異種肝移植的實(shí)驗(yàn)研究;精細(xì)的操作技術(shù)、熟練的血管縫合技術(shù)和袖套法血管吻合技術(shù)及良好的麻醉技術(shù)是保證模型制作成功的關(guān)鍵。
　　 2.豚鼠至大鼠異種肝移植后迅即發(fā)生HAR,顯示該

9、模型是一實(shí)用的動(dòng)物模型,可用于探索免疫反應(yīng)機(jī)制或檢測(cè)免疫抑制藥物的敏感性及其免疫抑制效果。
　　 3.在豚鼠至大鼠異種肝移植中發(fā)生的HAR是一種強(qiáng)烈的免疫反應(yīng),抗原抗體介導(dǎo)的補(bǔ)體激活是其發(fā)生的關(guān)鍵;受體血清預(yù)處理供肝及聯(lián)合應(yīng)用CVF能延長(zhǎng)受體存活時(shí)間,減輕肝臟病理?yè)p害,可明顯延緩異種肝移植HAR的發(fā)生時(shí)間,并在一定程度上減輕HAR的反應(yīng)強(qiáng)度,說(shuō)明受體血清預(yù)處理供肝及聯(lián)合應(yīng)用CVF對(duì)異種肝移植HAR具有一定的抑制作用;IgG和補(bǔ)體