急性胰腺炎大鼠胰床毛細血管ZO-1蛋白的表達及早期腹腔引流對其影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　急性胰腺炎(Acutepancreatitis，AP)是由胰腺作為始動器官，引起的一系列瀑布式的、多器官組織的病理改變，毛細血管通透性的改變在此過程中充當著十分重要的傳遞及放大作用，本研究以胰床毛細血管為窗口，選擇緊密連接蛋白ZO-1蛋白為反應毛細血管通透性的指標，探討急性胰腺炎時大鼠胰床毛細血管內(nèi)皮細胞表達ZO-1蛋白變化及其與毛細血管通透性改變的關系，并將臨床上治療重癥急性胰腺炎(Severeacutepancre

2、atitis，SAP)應用較廣、技術成熟的腹腔置管引流轉(zhuǎn)化為大鼠模型，在尋找可能導致ZO-1蛋白變化因素的同時探究早期腹腔引流對急性胰腺炎大鼠干預影響可能的作用機制。
　　方法:
　　本研究以健康SPF級雄性Wistar大鼠為實驗動物，體重200-250g，適應性喂養(yǎng)1周后將120只Wistar大鼠隨機分為3組:假手術組（A組），SAP組（B組），SAP引流組（C組），每組40只。并于每組設置術后1h、3h、6h、12h、2

3、4h五個時相點，各時相點分配8只。A組行開腹手術，僅翻動胰腺后關腹，B組采用逆行胰膽管5％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)微泵注射法制造SAP模型，確定沿胰管走向出現(xiàn)出血、水腫等征象后關腹，C組在B組基礎上即時行腹腔引流，即在大鼠下腹置入引流管，分層關腹后于引流管尾端接引流袋;所有大鼠均給與基本液體治療，即術后于大鼠背部皮下注射40ml/kg體重37℃生理鹽水，每12h注射一次，以背部出現(xiàn)明顯皮丘為成功標志，術前12h及術后禁食不禁水

4、。并于手術后1h、3h、6h、12h、24h取大鼠外周靜脈血、腹水及胰腺組織，取樣前30分鐘于股靜脈注射5％伊文思藍(Evan'sBlue，EB)(1ml/1kg).采用ELISA法測定大鼠血清及腹水中的白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-a)、核因子κB(NF-κB)、緊密連接蛋白ZO-1的變化。淀粉酶采用美國Beckman公司全自動生化分析儀檢測，胰蛋白酶活性采用分光光度法檢測。胰腺毛細血管通透性采用分光光度法檢測周圍

5、胰腺組織的伊文思藍濃度實現(xiàn)。記錄腹水量。觀察12h、24h生存率。胰腺組織作病理切片行HE染色后觀察病理變化并行病理評分。免疫組化檢測胰床毛細血管ZO-1蛋白表達的變化。
　　結(jié)果:
　　1，實驗大鼠一般情況:假手術組大鼠術后與術前無明顯差異。SAP組大鼠術后精神萎靡，活動量減少，食欲差，尿量少;且隨時間延長，上述癥狀逐漸加重。引流組大鼠術后至6h，基本情況與SAP組大鼠相似，6h后精神較SAP組好，活動量增加，尿量增加，且

6、引流組隨引流時間的延長，癥狀逐漸好轉(zhuǎn)。
　　2，SO組24h總死亡率為0％，SAP組12h死亡率為47.5％、24h總死亡率為67.5％，引流組12h死亡率為12.5％、24h總死亡率為22.5％。
　　3，胰腺組織病理變化:SO組大鼠胰腺組織較正常無明顯異常;SAP組大鼠胰腺組織早期水腫明顯，出現(xiàn)點狀出血、散在壞死灶、少量中性粒細胞浸潤，隨時間延長，鏡下可見腺泡小葉結(jié)構破壞、實質(zhì)出血、片狀壞死、大量中性粒細胞和單核細胞浸潤

7、;引流組胰腺組織術后3h可見胰腺充血水腫，但較SAP組稍輕，6-12h胰腺充血水腫明顯，胰腺局部點狀壞死，少量間質(zhì)炎性細胞浸潤，24h胰腺充血水腫減輕、壞死程度減輕。
　　4，實驗各組血清及腹水中TNF-α、NF-κB、IL-8的表達水平變化:SAP組大鼠血清中TNF-α、NF-κB、IL-8的表達水平較SO組及引流組顯著升高(p＜0.05);SAP組大鼠腹水中TNF-α、NF-κB、IL-8的表達水平明顯高于引流組(p＜0.05

8、)。
　　5，實驗各組血清及腹水中胰淀粉酶和胰蛋白酶表達水平的變化:血清中胰淀粉酶活性SAP組和引流組均高于SO組(p＜0.05)，SAP組腹水中淀粉酶明顯高于引流組(p＜0.05)，血清中胰蛋白酶活性SAP組高于引流組，而腹水中胰蛋白酶活性6h時SAP組高于引流組，12h后引流組高于SAP組(p＜0.05)。
　　6，實驗各組ZO-1表達水平的變化:SAP組及引流組血清中ZO-1蛋白濃度明顯高于SO組(p＜0.05);腹水

9、及血清中ZO-1蛋白的濃度SAP組均高于引流組(p＜0.05)，且隨時間推移，SAP組腹水及血清中ZO-1蛋白濃度逐漸升高，引流組腹水及血清中ZO-1蛋白濃度逐漸降低(p＜0.05);胰床毛細血管壁ZO-1蛋白的表達引流組明顯高于SAP組(p＜0.05);血清中ZO-1蛋白與胰蛋白酶、淀粉酶和TNF-α濃度正相關，其中與淀粉酶正相關系數(shù)為0.87，P＜0.05，與胰腺組織損害程度也呈明顯正相關(Pearson相關系數(shù)0.96，P＜0.0

10、5)。
　　7，胰床毛細血管通透性變化:毛細血管周圍胰腺組織的EB含量為SAP高于引流組(p＜0.05)，隨時間發(fā)展，SAP組周圍胰腺組織EB含量逐漸升高，引流組逐漸降低;引流組腹水量子各時相點均少于SAP組。
　　結(jié)論:
　　1，大鼠重癥急性胰腺炎時，胰蛋白酶及TNF-α作為胰腺炎的早期使動因素，在AP早期就有明顯的變化，隨后血清中ZO-1蛋白升高，并且貫穿AP大鼠始終，主要來源考慮為毛細血管壁上ZO-1蛋白的破壞脫