SHR和2K1C兩型高血壓大鼠血管重構(gòu)及與ERK1-2信號(hào)通路關(guān)系對(duì)比研究.pdf

1、目的：探討SHR和2K1C兩型高血壓模型血管重構(gòu)形式是否相同。檢測(cè)MAPK家族成員ERK1/2、上游調(diào)解激酶MEK1/2以及下游底物CPLA2在兩型高血壓模型中主動(dòng)脈和腎臟血管平滑肌細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)，對(duì)比研究ERK1/2信號(hào)通路在兩型高血壓模型血管平滑肌細(xì)胞增殖/凋亡中的作用及調(diào)節(jié)途徑，進(jìn)一步明確高血壓血管平滑肌細(xì)胞變化的分子機(jī)制。
　　方法：5周齡的雄性Wistarkyoto大鼠（WKY）36只，隨機(jī)分為兩腎一夾型高血壓組（簡(jiǎn)稱

2、2K1C組，18只）和假手術(shù)正常血壓對(duì)照組（簡(jiǎn)稱SHAM組，12只）以及空白對(duì)照組(簡(jiǎn)稱CON組,6只)。2K1C組大鼠用直徑0.25mm的銀夾部分夾閉左腎動(dòng)脈，關(guān)閉切口。SHAM組僅分離出左腎動(dòng)脈，不做其它處理，作為假手術(shù)對(duì)照組；空白對(duì)照組不做任何處理。術(shù)后各組大鼠分別觀察至8周齡、16周齡和24周齡。SHR大鼠不做特殊處理，分別于8周齡（簡(jiǎn)稱SHR8組，6只），16周齡（簡(jiǎn)稱SHR16組，6只）和24周齡（簡(jiǎn)稱SHR24組，6只）處

3、死，迅速提取腎臟和胸主動(dòng)脈，一半置于4％中性多聚甲醛溶液固定，行HE和免疫組化染色。另一半置于-80℃冰箱中凍存用于Western-blotting檢測(cè)。目鏡測(cè)微尺測(cè)量?jī)尚透哐獕捍笫蟾髦荦g主動(dòng)脈和腎臟細(xì)小動(dòng)脈血管中膜厚度/血管內(nèi)徑比值，免疫組織化學(xué)和Westernblot方法對(duì)比研究?jī)尚透哐獕捍笫笾鲃?dòng)脈、腎臟細(xì)小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中p-ERK1/2、p-MEK1/2及CPLA2的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、血壓變化：2K1C組大鼠造模一周后

4、血壓明顯升高(P<0.01)，隨后穩(wěn)定保持在較高水平（192.58±12.92mmHg）。SHR從8周齡組開始血壓升高，隨著周齡增加SHR組血壓逐漸升高，18周齡后，SHR組血壓明顯高于2K1C組(P<0.05)。2、SHR和2K1C各周齡組主動(dòng)脈、腎臟細(xì)小動(dòng)脈中膜厚度/管腔內(nèi)徑比值均明顯高于同周齡假手術(shù)組（P<0.01或P<0.05），相同周齡SHR和2K1C比較，SHR各周齡組小葉間動(dòng)脈血管中膜厚度/管腔內(nèi)徑比值明顯高于2K1C組（

5、P<0.01），SHR各周齡組腎小球損傷率均明顯高于同周齡2K1C組（P<0.01）。3、p-ERK1/2檢測(cè)情況：SHR和2K1C主動(dòng)脈、腎臟細(xì)小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p-ERK1/2表達(dá)均明顯高于同周齡假手術(shù)組。相同周齡SHR和2K1C比較，2K1C16周齡組主動(dòng)脈和8、16、24周齡組小葉間動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p-ERK1/2明顯高于相應(yīng)SHR組（P<0.05或P<0.01）。4、p-MEK1/2檢測(cè)情況：SHR和2K1C主動(dòng)脈、腎臟細(xì)小動(dòng)脈平

6、滑肌細(xì)胞p-MEK1/2表達(dá)均明顯高于同周齡假手術(shù)組。相同周齡SHR和2K1C比較，2K1C16和24周齡組主動(dòng)脈、2K1C24周齡組葉間、弓形動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p-MEK1/2表達(dá)均明顯高于相應(yīng)SHR組（P<0.05）。SHR16周齡組小葉間動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p-MEK1/2表達(dá)明顯高于相應(yīng)2K1C組（P<0.05）。5、CPLA2檢測(cè)情況：SHR和2K1C主動(dòng)脈、腎臟細(xì)小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞CPLA2表達(dá)均明顯高于同周齡假手術(shù)組（P<0.05或P

7、<0.01）。相同周齡SHR和2K1C比較，2K1C8和16周齡組葉間動(dòng)脈CPLA2表達(dá)明顯高于相應(yīng)SHR組（P<0.05），SHR8、16、24周齡組小葉間動(dòng)脈CPLA2表達(dá)明顯高于相應(yīng)2K1C組（P<0.05或P<0.01）。
　　結(jié)論：1、SHR和2K1C兩型高血壓大鼠血壓變化趨勢(shì)不同。SHR高血壓大鼠血壓長(zhǎng)期穩(wěn)定并隨周齡增長(zhǎng)而逐漸增高，2K1C未隨周齡增長(zhǎng)而逐漸增高。2、SHR和2K1C兩型高血壓大鼠主動(dòng)脈和腎臟細(xì)、小動(dòng)脈