2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩43頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、宿主對(duì)朊毒體(prion)的敏感性與細(xì)胞型朊蛋白(PrPc)的表達(dá)量密切相關(guān),表達(dá)量越高,對(duì)朊毒體越敏感。擁有高效表達(dá)PrPc的細(xì)胞系對(duì)朊毒體生物學(xué)研究具有十分重要的意義。為獲得這種對(duì)朊毒體敏感的細(xì)胞模型,本研究以Neuro-2a細(xì)胞為基礎(chǔ),利用pCDNA3.1(-)真核表達(dá)載體,攜帶PrP/GFP融合基因,轉(zhuǎn)染至Neuro-2a細(xì)胞。經(jīng)熒光和抗性的雙重連續(xù)篩選,獲得了穩(wěn)定、高效表達(dá)PrPc的細(xì)胞系。 根據(jù)已公布的小鼠PrP基因

2、以及pEGFP載體的GFP基因序列設(shè)計(jì)引物,分別以小鼠基因組和pEGFP質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增PrP和GFP基因。將這兩個(gè)基因分別克隆到pGEM-T載體中,獲得pGEM-mPrP和pGEM-GFP兩個(gè)重組質(zhì)粒,進(jìn)行測(cè)序分析。分別用EcoRⅠ和BamHⅠ、BamHⅠ和HindⅢ以及EcoRⅠ和HindⅢ酶切pGEM-mPrP、pGEM-GFP和pCDNA3.1(-)質(zhì)粒,電泳、切膠回收。將這三個(gè)片段共連接,從而獲得融合mPrP/GFP基因

3、的真核表達(dá)質(zhì)粒pCDNA3.1(-)-mPG。由于在PrPC-端融合了綠色熒光蛋白(GFP),使該系統(tǒng)具備了早期篩選的標(biāo)簽。用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Neuro-2a神經(jīng)細(xì)胞,用G418抗性篩選、熒光顯微鏡檢測(cè)、Western-Blotting檢測(cè)、PCR檢測(cè)、連續(xù)傳代法篩選能夠穩(wěn)定、高效表達(dá)PrP/GFP蛋白的細(xì)胞株。本實(shí)驗(yàn)成功獲得了一株高效表達(dá)PrP/GFP蛋白的Neuro-2a細(xì)胞株(命名為mPGN2

4、a),為朊毒體的研究提供了較理想的細(xì)胞模型。RNA干擾(RNAi)技術(shù)能夠高效、特異的抑制目的蛋白的表達(dá),因此是一種有利的蛋白功能研究技術(shù)。為便于PrP功能研究,本實(shí)驗(yàn)初步探索了利用載體表達(dá)shRNA的方法干擾PrP表達(dá)。 以小鼠PrP編碼基因?yàn)榘谢?,設(shè)計(jì)針對(duì)PrP的干擾片段。在該片段兩端添加ApaⅠ和EcoRⅠ粘性末端作為接頭,用ApaⅠ和EcoRⅠ酶切載體pSilenceU6-1.0。將干擾片段與載體共連接,構(gòu)成重組質(zhì)粒。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論