丙戊酸對體外培養(yǎng)的上皮性卵巢癌細胞SKOV-,3-血管生成和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：探討丙戊酸(valproic acid，VPA)對人卵巢癌細胞株SKOV<,3>細胞增殖以及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、上皮性鈣粘附素(E．cadherin)和基質(zhì)金屬蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase-2、9)表達的影響。 方法：將VPA以不同濃度(0、1、2、3、4、5mmol/L)、不同作用時間(24、48、72h)

2、作用于SKOV<,3>細胞，在相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化；用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法測定細胞增殖；用流式細胞儀測定細胞周期動力學變化；用免疫細胞化學方法檢測VEGF、E-cadherin及MMP-2和MMP-9蛋白表達情況；用流式細胞學測定SKOV3細胞VEGF、E-cadherin及MMP-2和MMP-9蛋白含量。 結(jié)果：(1)倒置顯微鏡下觀察：對照組細胞生長旺盛，呈叢簇狀排列，細胞長梭形或多邊形，細胞形態(tài)飽滿，胞質(zhì)

3、豐富，胞核居于細胞中央；實驗組當用藥濃度為≤2mmol/L時，細胞生長未見明顯抑制，3mmol/L以上隨藥物濃度增加，貼壁的正常細胞數(shù)逐漸減少，這些細胞多散在或呈小堆排列，細胞皺縮呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)皺縮。 (2)VPA濃度為3～5mmol/L時，對SKOV3細胞體外生長均有明顯的抑制作用。作用第3d時，細胞抑制率分別為18.92％、32.70％、48.65％，呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。在同一藥物濃度下，細胞抑制率隨作用時間的延

4、長有增加趨勢：同一作用時間，細胞抑制率隨藥物濃度的增加有增加趨勢。 (3) VPA處理24h后開始出現(xiàn)細胞周期阻滯，隨濃度增加G<,1>期細胞百分率增加，同時伴隨S期細胞百分率減少，G<,2>、M期變化不明顯。在一定的濃度隨之增加。相同藥物濃度，不同作用時間所誘導的SubG<,1>百分率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；作用時間相同，增加藥物濃度，SubG<,1>百分率比較，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (

5、4)免疫細胞化學顯示VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白陽性表達部位主要位于細胞漿，實驗組(3mmol/L)與對照組(0mmol/L)染色位置一致，但對照組染色強度較強；E-cadherin蛋白陽性信號主要位于細胞漿和細胞膜，實驗組(3mmol/L)與對照組(Ommol/L)染色位置一致，但染色強度明顯增加。 (5)流式細胞儀檢測結(jié)果表明，在給藥48h后E-cadherin蛋白表達增強，VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白表

6、達均減弱，對照組與實驗組的熒光指數(shù)有明顯的統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)VPA對體外培養(yǎng)的上皮性卵巢癌sKOV<,3>細胞生長有明顯的抑制作用。 (2)VPA抑制SKOV<,3>細胞生長作用與其誘導的細胞周期G<,l>阻滯和細胞凋亡有關(guān)。 (3)VPA能下調(diào)SKOV<,3>細胞MMP-2及MMP-9的表達，上調(diào)E—cadherin的表達，可能具有抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的作用。 (4)VPA能下