基于不同標(biāo)記物的免疫層析方法檢測(cè)豬霍亂沙門氏菌的研究.pdf

1、豬霍亂沙門氏菌是一種重要的食源性致病菌，輕者能夠引發(fā)胃腸炎、傷寒和腹瀉，重者導(dǎo)致敗血癥，甚至死亡。豬霍亂沙門氏菌的暴發(fā)流行具有全球性，人類通過食用被豬霍亂沙門氏菌感染的食物而引起中毒。因此，研究建立高效、快速的方法檢測(cè)出食物中的豬霍亂沙門氏菌能有效切斷該菌的傳播途徑，防止中毒事件的發(fā)生。本文研究了不同納米材料（熒光微球、磁珠、金磁微粒）在雙抗夾心免疫層析快速檢測(cè)方法中的應(yīng)用。
　　第二章中制備了熒光微球免疫層析試紙條。在制備免疫熒

2、光微球的過程中，根據(jù)抗體偶聯(lián)率和檢測(cè)線信號(hào)強(qiáng)度優(yōu)化了抗體投入量以及偶聯(lián)體系的pH。此外，根據(jù)檢測(cè)線信號(hào)強(qiáng)度優(yōu)化試紙條檢測(cè)線的檢測(cè)抗體濃度。結(jié)果顯示：最優(yōu)抗體投入量為300μg/mg、偶聯(lián)體系最優(yōu)pH為6，檢測(cè)線最優(yōu)抗體濃度為2.0 mg/mL。該方法對(duì)純培養(yǎng)的豬霍亂沙門氏菌檢測(cè)靈敏度為1.9×106 CFU/mL；特異性較好，對(duì)金黃色葡萄球菌有弱交叉反應(yīng)。
　　第三章中將免疫磁分離技術(shù)和熒光微球免疫層析方法結(jié)合。根據(jù)捕獲效率優(yōu)化免

3、疫磁珠制備中抗體的投入量和捕獲過程中免疫磁珠的使用量，并研究了免疫磁珠對(duì)不同濃度豬霍亂沙門氏菌捕獲效果的影響。此外，根據(jù)熒光微球試紙條的檢測(cè)結(jié)果探究了熱處理過程中時(shí)間和溫度的影響。結(jié)果顯示：最優(yōu)抗體的投入量為30μg/mg，最優(yōu)免疫磁珠的用量為100μg/mL，該免疫磁珠對(duì)不同濃度豬霍亂沙門氏菌的捕獲效率在90％以上，最優(yōu)熱處理?xiàng)l件為75℃10 min。通過免疫磁珠對(duì)豬霍亂沙門氏菌進(jìn)行富集后，熒光微球免疫層析試紙條方法能檢測(cè)出濃度為1.

4、52×105 CFU/mL的目標(biāo)菌，比直接使用熒光微球試紙條方法的靈敏度提高了10倍。
　　第四章中建立了基于金磁微粒的免疫層析方法。本章節(jié)對(duì)金磁微粒進(jìn)行了表征。根據(jù)捕獲效率優(yōu)化了免疫金磁微粒制備過程中偶聯(lián)體系pH、抗體投入量，確定了捕獲過程中免疫金磁微粒用量，并評(píng)價(jià)了免疫金磁微粒的特異性和對(duì)不同濃度豬霍亂沙門氏菌的捕獲效率。在金磁微粒和抗體的偶聯(lián)過程中，偶聯(lián)體系最優(yōu)pH為6，最優(yōu)抗體加入量為150μg/mg。20μg/mL免疫金