癌細胞與血管內皮細胞縫隙連接細胞間通訊調控腫瘤轉移機理的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩45頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的: 建立大腸癌細胞與血管內皮細胞間縫隙連接通訊的模型,探討大腸癌細胞與血管內皮細胞粘附并建立縫隙連接細胞間通訊的條件,以及縫隙連接細胞通訊使血管內皮細胞發(fā)生形態(tài)和機能變化的機制,從基因水平闡明癌細胞之所以能穿出血管內皮進入靶器官繼續(xù)生長形成轉移瘤的機理,為防治腫瘤轉移提供理論依據(jù)。 方法: 1、細胞培養(yǎng) 胎兒臍靜脈灌注消化法獲得人血管內皮細胞,自制牛腦提取物加入培養(yǎng)基中;與不同轉移能力的人大腸癌細胞系

2、HT29、Lovo細胞共培養(yǎng)。 2、縫隙連接細胞間通訊的檢測 使用熒光分子探針6-羥基熒光素乙酰乙酸脂,以激光漂白后熒光恢復技術,對單獨培養(yǎng)的內皮細胞及與HT29細胞、Lovo細胞共培養(yǎng)之內皮細胞進行ACAS-570共聚焦激光掃描顯微鏡檢測。 3、通訊連接蛋白Cx43基因表達的檢測 采用免疫組化SP法,檢測單獨內皮細胞培養(yǎng)組、HT29細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組、Lovo細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組的Cx43蛋白表達

3、情況。 4、內皮細胞骨架蛋白Actin的檢測 利用ACAS-570共聚焦激光掃描顯微鏡,系統(tǒng)觀察單獨培養(yǎng)內皮細胞及與HT29細胞、Lovo細胞共培養(yǎng)之內皮細胞中Actin的定位和結構變化。 5、基因轉化 設計E-選擇蛋白的全基因片段引物并進行擴增,將其與pMD18-T載體連接。然后將含E-選擇蛋白基因的pMD18-T載體轉化大腸桿菌,再行質粒擴增和酶切分析。 結果: 1、以自制的牛腦提取物

4、代替生長因子,成功培養(yǎng)了人血管內皮細胞。 2、相鄰接觸的內皮細胞在激光漂白后出現(xiàn)熒光恢復現(xiàn)象。單獨內皮細胞培養(yǎng)組細胞經漂白處理后,胞內的熒光強度開始緩慢上升,而其相鄰接觸細胞的熒光強度開始逐漸下降。漂白后2.5min時,被漂白細胞的熒光強度達到高峰,隨后進入一個相對穩(wěn)定階段。漂白后5.2min時,相鄰兩細胞的熒光強度達到一致。與其它細胞無接觸的單個內皮細胞在熒光漂白后無熒光恢復現(xiàn)象。而HT29細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組較單獨內皮細胞

5、培養(yǎng)組熒光恢復明顯減緩;Lovo細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組熒光恢復更慢。 3、通訊連接蛋白Cx43免疫組化染色顯示,陽性細胞胞膜呈棕黃色。單獨內皮細胞培養(yǎng)組的細胞呈彌漫強陽性著色;低轉移能力的HT29細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組陽性細胞數(shù)量和著色強度明顯低于內皮細胞;而高轉移能力的Lovo細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組的細胞幾乎無Cx43陽性表達。 4、內皮細胞骨架蛋白Actin的免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),單獨內皮細胞培養(yǎng)組細胞內的Actin分布

6、均勻,細胞間連接緊密,無間隙形成;而HT29細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組中內皮細胞周邊的Actin基本消失,出現(xiàn)應力纖維(變粗、變短、紊亂),排列呈明顯的極向分布,細胞間縫隙形成;Lovo細胞與內皮細胞共培養(yǎng)組此表現(xiàn)更加顯著。 5、用設計的E-選擇蛋白的引物成功擴增出大小為3893bp的基因片段,成功構建了pcDNA3.1<'+>/E-selectin重組體。 結論: 1、大腸癌細胞與血管內皮細胞間建立的縫隙連接細胞間

7、通訊減少,高轉移能力的Lovo細胞的縫隙連接通訊數(shù)目減少尤其明顯。 2、Cx43表達異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。內皮細胞與大腸癌細胞粘附后,Cx43的表達降低甚至缺失,使細胞間通訊異常,機體對細胞的監(jiān)視和調控能力減弱。 3、大腸癌細胞與內皮細胞粘附后,可影響Actin在內皮細胞胞漿中的分布狀態(tài),致細胞間裂隙形成。 意義: 縫隙連接是進行細胞間物質和信息直接交流的細胞連接形式,也是目前發(fā)現(xiàn)的細胞間存在的

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論