N-甲基小檗胺對(duì)大鼠腸系膜阻力血管平滑肌細(xì)胞鈣激活鉀電流的作用.pdf

1、高血壓是危害人類健康的重要疾病,其發(fā)病因素是多方面的,然而,由于高血壓的主要表現(xiàn)是外周阻力血管張力持續(xù)升高,同時(shí)血管對(duì)加壓物質(zhì)的反應(yīng)性增高,因此,高血壓發(fā)病的血管機(jī)制受到高度重視.血管張力持續(xù)升高是血管舒縮活動(dòng)異常所致,血管舒縮活動(dòng)則取決于平滑肌的收縮與舒張狀態(tài).細(xì)胞膜離子通道的正?；顒?dòng)是血管平滑肌興奮舒縮過(guò)程的關(guān)鍵,也是維持細(xì)胞的興奮性與膜穩(wěn)定性的保證.其中,鈣通道與鉀通道的作用至為重要.鉀通道通過(guò)影響細(xì)胞膜電位引起電壓依賴性鈣通道的

2、開(kāi)放與關(guān)閉,改變胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度進(jìn)而影響血管的舒縮狀態(tài).近年來(lái)應(yīng)用膜片鉗技術(shù)發(fā)現(xiàn)血管平滑肌細(xì)胞膜上至少存在四種不同類型的鉀離子通道,鈣激活鉀(K<,Ca>)通道在調(diào)節(jié)血管的舒縮中起著重要作用.實(shí)驗(yàn)方法:1.大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的制備.Wistar大鼠,體重(300±20)g,由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供,♀♂兼用.10﹪水合氯醛4ml/Kg ip.麻醉,開(kāi)腹分離腸系膜動(dòng)脈A<,4>~A<,5>分支并迅速移至冰冷的含鈣生理鹽

3、溶液中,經(jīng)修飾后用小剪子將動(dòng)脈剪碎,用二步酶解法分離出單個(gè)血管平滑肌細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞數(shù)量最多、質(zhì)量最好時(shí),收集細(xì)胞.將細(xì)胞懸液保存于4℃冰箱中,8小時(shí)內(nèi)使用.2.I<,Kca>的電生理記錄.選取胞膜光滑完整,胞漿均勻,長(zhǎng)梭形舒展的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn).全細(xì)胞狀態(tài)形成后,用pCLAMP5.5.1軟件程序發(fā)放刺激并收集記錄信號(hào).采用保持電位為-60mV,刺激電位為-60mV~+60mV,步階脈沖10mV,波寬500ms,刺激間隔3s的方波鉗制方案進(jìn)行刺