β-磷酸三鈣對成骨細胞基因表達的影響及骨粘連蛋白的純化.pdf

1、武漢理工大學碩士學位論文β-磷酸三鈣對成骨細胞基因表達的影響及骨粘連蛋白的純化姓名：汪靜申請學位級別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學工程指導(dǎo)教師：陳曉明20070501武漢理工大學碩士學位論文A b s t r a c tC a l c i u mp h o s p h a t em a t e r i a l sh a v eb e e nw i d e l yu s e d i n t h eb i o m e d i c a l f i e

2、l d s ，e s p e c i a l l y i n b o n er e p a i r i n g a n dr e c o n s t r u c t i o n ．M o r e a n dm o r e r e s e a r c h e r s a r ec o n c e n t r a t i n g o n t h e m e c h a n i s m t h a t h o w t h e c a l c

3、i u m p h o s p h a t e m a t e r i a l s a r ei n v o l v e di nt h el i f ei nr e c e n ty e a r s ．I nt h i sp a p e r , w o r k s w e r e c a r r i e do u t t o i n v e s t i g a t et h i se f f e c ta n dd i s s c u

4、 s st h eb i o m i n e r a l i z a t i o no ft h ec a l c i u mp h o s p h a t em a t e r i a l sb yc e l l b i o l o g y a n d b i o m o l e c u l a r m e t h o d s ．T h eo s t e o b l s t sw e r ei s o l a t e df r o m

5、t h en e wb o m W i s t e rr a t sb y e n z y m a t i cc e l li s o l a t i o na n de x p l a n t e dc u l t u r em e t h o d s ．I nt h i s e x p e r i m e n tt h ec e l l sw e r ea c q u i r e df r o mt h e c a l v a r

6、i a l b o n e so fr a t ss u c c e s s f u l l y , a n dt h e o s t e o b l a s t sw e r ep u r i f i e d b yN a s h ’sm e t h o d ．A f t e rc u l t u r e dt h eo s t e o b l a s t sf o r s o m e d a y s ，t h ec e l l sw

7、 e r e i d e n t i f i e db yc e l l m o r p h o l o g y , A L Pa c t i v i t y , a n dc a l i u mn o d u l e ．T h er e s u l t s h o w e dt h a t t h eo s t e o b l a s t sa c q u i r e db y t h et w om e t h o d g d i

8、s p l a y e dh i g ha l k a l i np h o s p h a t a s ea c t i v i t ya n dc a l c i f i e dn o d u l e ·f o r m i n ga c t i v i t y , w h i c hc a n t e s t i f yi ft h eo s t c o b l a s t sh a v eg o o db i o l o

9、 g i c a lc h a r a c t e r i s t i c ．I tw a s t u r n e do u t t h a tt h ec e l l s c a n s a t i s f i e dt h en e e do fo u rr e s e a r c h , a n d t h e c e l l s t h a n b e u s e d f o r t h e f u r t h e r e x

10、p e r i m e n t ．A s w e l l ，i no u re x p e r i m e n t t h es a m et i s s u ew e r ec u l t u r e df o rs e v e r a lt i m e s ，a n dt h eo s t e o b l a s t sw e r ea c q u i r e dt h eo s t e o b l a s t ss u c c e

11、 s s f u l l y , A f t e rt h eo s t e o b l a s t sw e r es t M n e dw i t ha l k a l i np h o s p h a t a s t e , t h e o s t e o b l a s t sa c q u i r e df r o mt h e s a m et i s s u e a l s oe x h i b i t e da g o

12、o db i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c ．T h e r e s u l t s t e s t i f i e d t h a t t h e o s t e o b l a s t a c q u i r e d b yc o n t i n u i n g t i s s u e c u l t u r i n g m e t h o dh a v e g o o db

13、 i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s ，a n d c a na p p l y i n t o t h ef u r t h e r e x p e r i m e n t ．T h r o u g h t h e c o —c u l t u r e d e x p e r i m e n t o f o s t e o b l a s t a n d 1 3 - T C

14、P ／nv i t r o ，t h ee n d o c y t o s i s p h e n o m i n a w a s o b s e r v e d ，t h e 1 3 一T C P c a n b e e n d o c y t o s i s e d b yo s t e o b l a s t s ．T h eM T T a s s a ys h o w e dt h a t t h eB - T C P a l

15、s o c a l l p r o m o t eg r o w t ha n dp r o l i f e r a t i o n o ft h e o s t e o b l a s t s ．A f t e r t h e1 3 - T C Pa n d0 s t o b l a s t s c o ．c u l t u r e d f o r ap e r i o do ft i m e ，t h e t o t a I R N

16、 A w e r ee x t r a c t e df r o mt h e o s t e o b l a s t s ，a n dt h em R N Ae x p r e s s i o nl e v e l o ft h eA l k a l i np h o s p h a t a s e ( A L P ) ，O s t e o n e c t i n ( 0 N N ) ，o s t e o p o n t i n( O

17、 P N ) w e r e t e s t e d t h r o u g ht h e m e t h o do ft h e R T - P C Ra n d P C Rt e s t a s s a y ．T h ee x p e r i m e n t s h o w e dt h a t a f t e r t h e o s t e o b l a s t s w e r e c o —c u l t u r e d w

18、i t hB - T C P , t h eo s t e o b l a s t s ’m R N A e x p r e s s i o nl e v e lo f A L P ，O N N a r e h i g h e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p ，a n d 1 5 - T C Pc a n a f f e c t t h e g e n e e x p r e s s i o nl