他汀類藥物對SD乳鼠心肌成纖維細胞增殖的抑制作用和凋亡的誘導作用及其信號轉(zhuǎn)導通路研究.pdf

1、慢性充血性心力衰竭(CHF)是各種心臟疾病發(fā)展的終末階段,其發(fā)病率和病死率隨著全球老齡化的不斷加劇逐年增多。目前雖有多種藥物可改善心衰患者癥狀,但真正能夠阻斷甚至逆轉(zhuǎn)心衰進程的療法或藥物尚未問世。因此,關(guān)于心衰的發(fā)病機制和治療的研究仍在不斷深入。
　　 他汀類藥物是臨床上應用廣泛的降脂藥,有研究表明,他汀對心衰患者可能有益。本研究以培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌成纖維細胞(CFs)為研究對象,采用比色法、流式細胞術(shù)、Western Bl

2、ot和細胞免疫熒光染色,共聚焦顯微鏡掃描技術(shù)等實驗方法,觀察了醛固酮(Ald)誘導的心臟成纖維細胞增殖、DNA合成、膠原合成及細胞周期變化,及可能的分子機制;同時觀察HMG-CoA還原酶抑制劑阿托伐他汀(Ato)對Ald誘導的心臟成纖維細胞增殖、DNA合成、膠原合成及細胞周期變化的影響及其可能的分子機制;還應用比色法和形態(tài)學觀察、流式細胞術(shù)等凋亡檢測方法,分別測定了Ato和瑞舒伐他汀(Ros)對CFs增殖和凋亡的影響;并對脂溶性的Ato

3、和水溶性的Ros對心肌成纖維的抑制作用進行了比較。為闡明心肌纖維化的發(fā)生機制,防治心肌纖維化提供實驗依據(jù)。實驗內(nèi)容主要包括以下五部分:
　　 第一部分醛固酮對SD乳鼠心肌成纖維細胞增殖和膠原合成的促進作用及其信號轉(zhuǎn)導通路
　　 目的:研究Ald對SD乳鼠CFs增殖和膠原合成的促進作用及其作用機制。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,以Ald誘導其增殖和膠原合成,并加入螺內(nèi)酯(Spi)干預,采

4、用MTT法檢測CFs的增殖,Brdu法檢測CFs的DNA合成,流式細胞術(shù)檢測CFs細胞周期,羥脯氨酸試劑盒檢測CFs膠原合成,免疫熒光染色、激光共聚焦顯微鏡掃描半定量p-ERK1/2、p-AKT、Cyclin D1、Cyclin E2的表達變化。
　　 結(jié)論:外源性Ald可誘導CFs增殖、DNA合成和膠原合成,發(fā)揮其致心肌纖維化作用,此作用與其通過ERK1/2和Akt通路上調(diào)周期蛋白Cycin D1和Cyclin E2表達有關(guān)。

5、
　　 第二部分阿托伐他汀對醛固酮誘導的SD乳鼠心肌成纖維細胞增殖和膠原合成的抑制作用及其機制探討
　　 目的:研究Ato對Aid誘導的SD乳鼠CFs增殖和膠原合成的抑制作用及其作用的分子機制。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,以Ald誘導其增殖和膠原合成,并加入Ato干預,采用MTT法檢測CFs的增殖,Brdu法檢測CFs的DNA合成,流式細胞術(shù)檢測CFs周期,羥脯氨酸試劑盒檢測CFs膠

6、原合成,免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡掃描和Western Blot半定量p-ERK1/2、p-AKT、Cyclin D1、Cyclin E2的表達變化。
　　 結(jié)論:Ato可明顯抑制Ald誘導的CFs增殖、DNA合成和膠原合成,抑制Ald的致心肌纖維化作用,此作用與其通過抑制ERK1/2和Akt通路,進而抑制周期蛋白Cycin D1和Cyclin E2表達有關(guān)。
　　 第三部分阿托伐他汀對SD乳鼠心肌成纖維細胞增殖的抑

7、制作用和對凋亡的誘導作用
　　 目的:研究Ato對SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ato干預,采用MTT法檢測CFs的增殖,Brdu法檢測CFs的DNA合成,倒置生物顯微鏡和熒光顯微鏡檢測凋亡細胞形態(tài),流式細胞術(shù)檢測CFs凋亡率。
　　 結(jié)論:10-7～104mol/L Ato不僅可抑制CFs增殖和DNA合成,還可時間和劑量依賴性的誘導

8、CFs凋亡。
　　 第四部分瑞舒伐他汀對sD乳鼠心肌成纖維細胞增殖的抑制作用和對凋亡的誘導作用
　　 目的:研究Ros對SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ros干預,采用MTT法檢測CFs的增殖,Brdu法檢測CFs的DNA合成,倒置生物顯微鏡和熒光顯微鏡檢測凋亡細胞形態(tài),流式細胞術(shù)檢測CFs凋亡率。
　　 結(jié)論:10-7～10-

9、5mol/L Ros不僅可抑制CFs增殖和DNA合成,還可以時間和劑量依賴性的誘導CFs凋亡。
　　 第五部分阿托伐他汀和瑞舒伐他汀對SD乳鼠心肌成纖維細胞增殖抑制作用比較
　　 目的:比較Ato和Ros對SD乳鼠CFs增殖的抑制作用和凋亡的誘導作用。
　　 方法:用胰酶消化法分離并培養(yǎng)新生SD大鼠的CFs,并加入Ato或Ros干預,采用MTT法檢測CFs的增殖,Brdu法檢測CFs的DNA合成,流式細胞術(shù)檢測C