甘蔗ATP-檸檬酸裂解酶基因(SoACLA-1)的克隆與功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前發(fā)現(xiàn),生物體中的ATP-檸檬酸裂解酶(ACL)發(fā)揮著重要作用,其具有以下四大主要功能:(1)生成胞間乙酰-輔酶A;(2)作為脂肪酸合成的調(diào)控酶;(3)提高植物抗逆性;(4)參與了有性生殖的調(diào)節(jié)。但與甘蔗ACL相關(guān)的基因功能研究在國內(nèi)外尚未見報道。本研究利用分子生物學(xué)技術(shù),研究了SoACLA-1基因功能。主要結(jié)果如下:
　　1.克隆SoACLA-1基因。根據(jù)甘蔗SoACLA-1基因(登錄號為JQ292843.1)的序列,在ORF

2、的兩端設(shè)計特異引物,通過PCR技術(shù),克隆了甘蔗SoACLA-1基因編碼區(qū)全長1272 bp的cDNA片段。
　　2.構(gòu)建雙元植物表達(dá)載體。將克隆的cDNA片段正向插入PRI101-AN雙子葉植物表達(dá)載體,命名為SoACLA-1-PRI101-AN;將克隆好的cDNA片段反方向插入PRI101-ON單子葉植物表達(dá)載體,命名為SoACLA-1-PRI101-ON。
　　3.獲得轉(zhuǎn)基因煙草和轉(zhuǎn)基因甘蔗。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法分

3、別將SoACLA-1-PRI101-AN轉(zhuǎn)化煙草(Nicotiana tabacum L.cv.K346),將SoACLA-1-PRI101-ON轉(zhuǎn)化甘蔗品種新臺糖22號(ROC22)。通過PCR、Southern雜交檢測,獲得了44株轉(zhuǎn)基因煙草和21株轉(zhuǎn)基因甘蔗。
　　4.Real-time RT-PCR表明,轉(zhuǎn)基因煙草SoACLA-1基因的表達(dá)量顯著高于野生型植株,隨著干旱脅迫的增加,該基因表達(dá)量呈拋物線狀態(tài)增長;中度干旱脅迫

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