綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)對大鼠的致瘤性的研究.pdf

1、目的：為深入探討綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)的致瘤性作用，以及對動物機體各項生理指標(biāo)和相關(guān)基因的影響。
　　方法：將真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-env用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑經(jīng)尾靜脈轉(zhuǎn)染到幼齡大鼠體內(nèi)，在轉(zhuǎn)染21天后采用RT-PCR的方法及免疫組化法檢測真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-env在大鼠體內(nèi)的表達；在轉(zhuǎn)染6個月內(nèi)對轉(zhuǎn)染大鼠進行臨床指標(biāo)測定，每隔30d檢測外周血中淋巴細胞及其亞群的動態(tài)變化以及淋巴細胞凋亡情況，同時進行

2、血氣分析和腫瘤標(biāo)志物的檢測；對大鼠肺臟組織K-ras基因、P53基因用SSCP的方法檢測基因突變情況；通過制作病理切片觀察組織學(xué)病理變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染21d后真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-env在大鼠肺臟組織存在表達。在轉(zhuǎn)染180d的期間內(nèi)，外周血中CD4+和CD8+T淋巴細胞水平在整個過程未呈現(xiàn)出顯著變化；凋亡細胞水平在整個過程中沒有發(fā)生明顯的凋亡程度變化；血氣分析結(jié)果顯示pCO2、 pO2、 Hct、 BE(ecf)等十六

3、項指標(biāo)在不同時期與對照組比較，不存在顯著性差異。腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）檢測結(jié)果均在正常范圍內(nèi),轉(zhuǎn)染組與對照組比較沒有發(fā)生顯著變化。K-ras基因、P53基因沒有發(fā)生突變情況。病理組織學(xué)觀察沒有發(fā)現(xiàn)特征性病理學(xué)變化。
　　結(jié)論：本研究在大鼠體內(nèi)檢測到JSRV-env基因mRNA表達，同時可檢測到Env基因的蛋白表達，證明已經(jīng)成功的將JSRV–env基因轉(zhuǎn)染進肺臟細胞胞漿內(nèi)，而JSRV的Env糖蛋白除了最初在

4、病毒侵入細胞過程中的作用外，它還具有類似病毒致癌蛋白的作用，能夠直接刺激細胞轉(zhuǎn)化，這為下一步的致瘤作用奠定了初步的基礎(chǔ)。本實驗對轉(zhuǎn)染JSRV pcDNA3.1-env真核表達質(zhì)粒的大鼠分別進行血氣分析檢測，淋巴細胞亞群變化的檢測，淋巴細胞凋亡情況的檢測，腫瘤標(biāo)志物的檢測，相關(guān)基因突變的檢測以及組織病理學(xué)檢測，和對照組比較均未發(fā)現(xiàn)明顯的變化，證實綿羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)對大鼠尚未產(chǎn)生致瘤性作用。其主要原因可能是綿羊肺腺瘤