副豬嗜血桿菌Fur蛋白和豬鏈球菌PerR蛋白與啟動(dòng)子的相互作用.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎，主要危害2周齡～4月齡的豬，給全球的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）是一種在全世界范圍內(nèi)廣泛存在的重要的病原菌，受其影響，養(yǎng)豬業(yè)國(guó)家常常遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬鏈球菌現(xiàn)在分為33個(gè)血清型，豬鏈球菌2型（SS2）是其中最重要的，流行最廣的血清型。人接觸感染豬鏈球菌的病豬或食用病死豬肉，可能會(huì)感

2、染發(fā)病。
　　 Fur家族蛋白質(zhì)，包括Fur、Zur、Mur、Nur、PerR等，是細(xì)菌體內(nèi)的重要的金屬調(diào)節(jié)蛋白，與細(xì)菌所需的重要金屬離子的吸收調(diào)節(jié)密切相關(guān)，有些還能感應(yīng)其他信號(hào)如過(guò)氧化物或血紅素。它們能夠抑制或激活為數(shù)眾多的基因的啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖、毒力以及抵抗外界不利影響方面都起著著重要的作用。本研究旨在克隆表達(dá)HPS的Fur蛋白和SS2的PerR蛋白，分別研究它們與HPS和SS2相關(guān)基因啟動(dòng)子的相互作用，為這些

3、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．副豬嗜血桿菌的fur基因和豬鏈球菌perR基因的克隆表達(dá)
　　 根據(jù)已經(jīng)公布的基因序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR方法克隆HPS的fur基因以及SS2的perR基因，在大腸桿菌大腸桿菌BL21（DE3）中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)親和層析柱純化，超濾離心，得到純化濃縮后的蛋白Fur-HPS和PerR-SS2。經(jīng)SDS-PAGE分析，所得蛋白與目地蛋白大小一致。
　

4、　 2．副豬嗜血桿菌的Fur蛋白和豬鏈球菌PerR蛋白目標(biāo)基因啟動(dòng)子片段的制備
　　 利用實(shí)驗(yàn)室SCOTS技術(shù)篩選出的鐵限制條件下HPS和SS2中轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào)的基因，結(jié)合生物信息學(xué)方法分析及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，預(yù)測(cè)出分別與Fur-HPS和PerR-SS蛋白互作的目標(biāo)基因啟動(dòng)子片段，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增基因上游啟動(dòng)子片段，作為與這兩種蛋白互作的目標(biāo)基因啟動(dòng)子片段。所得的PCR產(chǎn)物與預(yù)計(jì)大小一致。
　　 3．Fur蛋白和PerR蛋白與啟