1.ecadherin和βcatenin基因在腸上皮化生和腸型胃癌中表達及甲基化研究;2.正常胃粘膜細胞與腸上皮化生細胞差異表達基因片段的克隆及表達研究

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文1.E-cadherin和β-catenin基因在腸上皮化生和腸型胃癌中表達及甲基化研究;2.正常胃粘膜細胞與腸上皮化生細胞差異表達基因片段的克隆及表達研究姓名：馬鳴超申請學位級別：博士專業(yè)：遺傳學指導教師：孫開來2001.4.1粘膜中的幽門螺旋桿菌。5 ．c D N A 代表性差異分析( c D N A ．R D A ) ：L C M 點擊2 5 0 0 次大約分別捕獲5 0 0 0 個正常胃粘膜細胞和腸上皮化

2、生細胞。用改進的c 亡心叮A —R D A 方法比較了腸化生細胞和正常胃粘膜細胞的基因表達差異( 分別用來自于腸化生細胞和正常胃粘膜細胞的c D N A 擴增片段作為D r i v e r 和r r e s t e r ) 。具體改進步驟如下：( 1 ) 抽提c D N A 片段時用2 0 ul T E 在飽和酚氯仿中抽提兩次， 合并上層水溶液以提高產(chǎn)率：( 2 ) 在用乙醇沉淀之前向溶液中加入5 0 p gG l y c o g e

3、n 作為載體以提高產(chǎn)率；( 3 ) 用一2 0 ℃乙醇沉淀，2 0 ul H 0 溶解c D N A ：( 4 ) 本實驗在雜交時同時大幅度減少D r ～e r 和T e s t e rD N A ， 以適應(yīng)微量標本。每輪雜交均使用1 ugD r i v e rD N A ，而經(jīng)典c D N A ．I u ) A 每次雜交需要4 0 且g 鰣v e r 。6 ．R T - P C R 方法：( 1 ) 引物設(shè)計：根據(jù)各個差異片段序列及它

4、們所屬基因已知的c D N A 序列，利用P r i m e r P i c k i I l 烈P r i m e r 3 ) 軟件進行引物設(shè)計。( 2 ) R T —P C R ( 兩步法) ：用S u p e r S c 呻t ⅡR n a s e H —R e v e r s eT m s c 邱t a S e 試劑盒。每一c D N A 樣品同時用相應(yīng)目的基因引物和g a p d l l 引物( 內(nèi)對照) 同樣條件下分別進行各自

5、反應(yīng)和電泳。實驗結(jié)果1 ．病理學分析結(jié)果：在1 2 個胃癌標本中，有1 0 例腸型腺癌，其中有8 例出現(xiàn)慢性萎縮性胃炎和腸化生，說明腸型胃癌中腸上皮化生比率之高。2 ．免疫組化方法分析腫瘤相關(guān)基因表達的結(jié)果：E - c a d h e r i n 在正常胃粘膜細胞中高表達，在胃癌細胞中表達減弱或消失，而且這種變化在腸上皮化生細胞中就已經(jīng)開始。 縣?！辴 e n i n 在正常腺體細胞、腸上皮化生細胞以及腸型胃癌表達基本相同。3 個彌漫型