簡介：該課題所研究的新分子RAB7B是在對(duì)人樹突狀細(xì)胞DENDRITICCELLDC的CDNA文庫隨機(jī)大規(guī)模測序中發(fā)現(xiàn)的我們通過5RACE獲得了全長基因的編碼序列然后利用DC的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物模板克隆了RAB7B的全長CDNA已經(jīng)在GENBANK登錄基因登錄號(hào)為AF094596RAB7BCDNA全長1571BP開放閱讀框600BP編碼199個(gè)氨基酸預(yù)計(jì)分子量為225KDA蛋白序列比較發(fā)現(xiàn)此蛋白和另一個(gè)定位于晚期內(nèi)吞體的人源RAB7蛋白有很高的一致性因此我們把它命名為RAB7B通過同源性搜索在核酸水平上與人BC017092和鼠BC019395克隆分別有99％和85％的同源性蛋白水平上與人RAB7分別有超過50％的一致性和65％的相似性同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)一個(gè)鼠源的和人源RAB7B有92％相似程度的蛋白可能是鼠源的RAB7B同源性蛋白總之我們發(fā)現(xiàn)和克隆了一個(gè)新的RABGTPASE在基因和蛋白水平上與人RAB7有較高的的同源性命名為RAB7B初步的生物學(xué)功能研究提示定位在溶酶體可能參與胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸?shù)耐砥陔A段在髓系細(xì)胞的單核細(xì)胞分化階段表達(dá)增加目前RAB7B的具體功能及作用機(jī)制還不明確還需大量精細(xì)的工作除了以上的工作外我們已構(gòu)建了RAB7B不同功能域的定點(diǎn)突變體以準(zhǔn)備進(jìn)一步的研究

簡介：點(diǎn)擊查看更多阿爾茨海默病大鼠模型的磁共振、行為學(xué)、電生理、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述第一部分眼咽肌病綜合癥患者的臨床特點(diǎn)分析本研究選取19952013年間于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院和北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的18個(gè)眼咽肌病綜合癥家系。所有先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查及PABPN1基因篩查。根據(jù)PABPN1基因篩查結(jié)果，明確13個(gè)家系共34例患者為OPMD，5個(gè)家系共21例患者經(jīng)基因篩查未發(fā)現(xiàn)PABPN1突變，診斷為OPDM。OPMD組患者平均起病年齡為472±112歲（2767歲）。最常見的首發(fā)癥狀為吞咽困難，占53％1834，平均起病年齡為448±107歲其次為眼瞼下垂，占26％934，平均起病年齡為578±77歲。以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早P00036。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為155±126年（153年），79％2734的患者出現(xiàn)眼瞼下垂，由此導(dǎo)致的視野受損成為本組患者中最大的困擾88％3034出現(xiàn)吞咽困難53％1834出現(xiàn)眼外肌麻痹41％1434出現(xiàn)肢體無力，皆以近端為主。同一家系內(nèi)部在首發(fā)癥狀及受累肌肉分布特點(diǎn)方面有高度的一致性。OPDM組患者平均起病年齡為264±587歲（2239歲）。本組患者中，最常見的首發(fā)癥狀是四肢肌無力，占38％821。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為156±899年（134年），95％2021的患者出現(xiàn)眼瞼下垂和眼外肌麻痹52％1121出現(xiàn)吞咽困難，4例患者后期僅能進(jìn)食半流質(zhì)57％1221出現(xiàn)肢體無力，皆首先累及肢體遠(yuǎn)端，其中5例患者在起病12～15年后喪失獨(dú)立行走能力，需依賴輪椅。以四肢肌無力首發(fā)的家系普遍進(jìn)展較快，2例患者在起病后17年（40歲）由于OPDM相關(guān)的吸入性肺炎及營養(yǎng)不良死亡。同一家系內(nèi)部在起病年齡、首發(fā)癥狀及進(jìn)展速度上具有一致性。第二部分眼咽肌病綜合癥患者的肌肉病理特點(diǎn)分析18個(gè)家系的先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查。肌肉標(biāo)本常規(guī)行組織學(xué)、酶組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色，包括蘇木素伊紅HE、改良GOMI三色MGT、高碘酸SCHIFF反應(yīng)PAS、油紅“O”脂肪染色O、還原型輔酶Ⅰ四氮唑還原酶NADHTR、琥珀酸脫氫酶SDH、細(xì)胞色素C氧化酶COX、三磷酸腺苷酶ATPASE（PH43，46，104和106）、DYSTROPHIN蛋白（C端，N端，ROD）、DYSFERLIN蛋白、（Α，Β，Γ，Δ）SARCOGLYCAN蛋白和CAVEOLIN3蛋白染色。其中部分先證者（7例OPMD患者及3例OPDM患者）接受電鏡檢查。本研究對(duì)照皆取自因肌無力而行肌肉活檢且病理結(jié)果為正常的肌肉標(biāo)本。OPMD及OPDM肌肉標(biāo)本在光鏡下病理改變相似，都表現(xiàn)為慢性肌源性改變伴肌纖維內(nèi)鑲邊空泡形成。OPMD中鑲邊空泡出現(xiàn)頻率平均為11±09％OPDM中平均為42±21％，較OPMD更為常見（P00159）。此外，OPDM肌肉損害較OPMD顯著，部分標(biāo)本可見呈小群分布的萎縮纖維，壞死伴吞噬，肌內(nèi)膜及間質(zhì)明顯增生。免疫組化染色未見異常。7例OPMD肌肉標(biāo)本行電鏡檢查，其中5例肌細(xì)胞核內(nèi)可見直徑約為85NM的管狀細(xì)絲樣包涵體。3例OPDM肌肉標(biāo)本電鏡下未發(fā)現(xiàn)肌核或肌漿內(nèi)管絲樣包涵體。第三部分眼咽型肌營養(yǎng)不良的分子生物學(xué)特點(diǎn)分析13個(gè)OPMD家系均經(jīng)PABPN1基因突變分析確診，先證者的DNA自活檢肌肉組織標(biāo)本中提取，家系成員DNA自外周血提取。本研究人群中共發(fā)現(xiàn)7種基因型，其中10個(gè)家系為單純GCG異常擴(kuò)增，另3個(gè)家系伴有GCA的插入。最常見的基因型為GCG9GCA3GCG1，占46％613。家系1中先證者為復(fù)合雜合突變GCG6GCA1GCA3GCG1GCG6GCA1GCG1GCA3GCG1其姐攜帶1個(gè)正常等位基因，另一等位基因?yàn)镚CG6GCA1GCG1GCA3GCG1其弟無臨床癥狀，但攜帶GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)，該多態(tài)以往未見報(bào)告。結(jié)合表型，單純GCG異常擴(kuò)增與伴有GCA插入的家系在臨床表現(xiàn)上無明顯差異。起病年齡及表型嚴(yán)重程度與GCN擴(kuò)增次數(shù)無明顯相關(guān)。家系1中，先證者發(fā)病早期即出現(xiàn)眼、咽及肢體肌肉的全面受累，而其姐僅有吞咽困難，提示GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)對(duì)表型可能具有調(diào)控作用。第四部分眼咽型遠(yuǎn)端肌病致病基因的探索外顯子序列雖然僅占基因組序列的1％，但卻包含了編碼和調(diào)控蛋白質(zhì)合成的主要信息。在符合孟德爾遺傳模型的疾病中，85％以上的突變位點(diǎn)都位于外顯子區(qū)域。目前，利用全外顯子組測序技術(shù)WHOLEEXOMESEQUENCING，WES已成功定位了超過100種先前未知的疾病致病基因，包括罕見疾病、復(fù)雜疾病、腫瘤等。OPDM的致病基因至今不明且相關(guān)研究甚少，缺乏較大家系且報(bào)道寥寥是其重要限制因素。而WES較全基因組測序及家系連鎖分析的突出優(yōu)勢(shì)則在于，其可利用小家系，甚至散發(fā)病例完成致病基因的定位工作。故本研究擬利用WES探索OPDM的致病基因。本研究選取家系2中2例患者Ⅲ7，Ⅲ9及1例正常人（Ⅲ9之父），自外周血提取全基因組DNA行WES。按照顯性遺傳模型（不完全外顯）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。家系2中其他成員及家系4用來驗(yàn)證可能的候選基因。3例送檢者平均檢出105641個(gè)基因變異位點(diǎn)，包括非同義突變、剪切位點(diǎn)變異，插入及缺失突變。經(jīng)數(shù)據(jù)分析及功能預(yù)測后的篩選，得到52個(gè)非同義突變及3個(gè)缺失突變。然而經(jīng)SANGER測序驗(yàn)證，未得到與疾病表型共分離的基因變異位點(diǎn)。結(jié)論1OPMD和OPDM為兩種獨(dú)立的疾病實(shí)體。吞咽困難是我國OPMD患者常見的首發(fā)癥狀，以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早（P00036）。OPDM患者中以肢體無力首發(fā)或可提示預(yù)后不良。在兩種疾病中，同一家系內(nèi)部的臨床表型都具有家族一致性，提示除致病基因外的其他遺傳背景可能參與調(diào)控OPMD及OPDM的表型。2我國OPDM患者光鏡下鑲邊空泡較OPMD更為常見P00159。3我國OPMD患者可見PABPN1基因單純GCG異常擴(kuò)增，亦可有GCA插入突變，同時(shí)存在GCN11多態(tài)。13個(gè)家系檢測到7種PABPN1基因突變類型，提示中國人群中OPMD患者并非來自共同祖先。GCG6GCA1GCA3GCG1為我們首次報(bào)道，該多態(tài)可能參與調(diào)控疾病表型。4本研究利用WES探索OPDM致病基因，未能得到與疾病表型共分離的基因突變。WES存在漏檢可能，另推測OPDM致病基因或可位于非編碼序列亦可能為短串聯(lián)重復(fù)序列及拷貝數(shù)變異。

簡介：獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名石扦／LL≯0年蟈’歸學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所、國家圖書館、中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時(shí)授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會(huì)提供查詢，授權(quán)中國學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本論文編入中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫并向社會(huì)提供查詢。論文的公布包括刊登授權(quán)江蘇大學(xué)研究生院辦理。本學(xué)位論文屬于不保密妙／學(xué)位論文作者簽名J彳鐘沙心年。加6J白指導(dǎo)教師簽名尖鑰H夢(mèng)移手

簡介：目的兒童感染性心內(nèi)膜炎INFECTIVEENDOCARDITISIE死亡率高，早期診斷和合理治療是改善預(yù)后的關(guān)鍵。本研究分兩部分1分析兒童IE臨床特點(diǎn)的變化，探討兒童IE的早期診斷和治療方法。2探討聚合酶鏈反應(yīng)PCR檢測經(jīng)手術(shù)治療的IE患者的心內(nèi)膜組織標(biāo)本中病原菌的方法，提高IE病原檢出率，探討分子生物學(xué)方法在感染性心內(nèi)膜炎病原學(xué)診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法1回顧性總結(jié)近10年1999年1月至2008年12月在本院住院的76例IE患兒的臨床資料，就超聲、血培養(yǎng)、治療及影響預(yù)后的因素等做一分析。2搜集12例臨床確診為IE患者的血標(biāo)本及心內(nèi)膜標(biāo)本，分別進(jìn)行培養(yǎng)和脫氧核糖核酸抽提、PCR擴(kuò)增及測序，12例IE心內(nèi)膜標(biāo)本的PCR結(jié)果與血培養(yǎng)結(jié)果對(duì)照。結(jié)果1IE患兒76例占同期住院患兒總數(shù)的086‰。，其中71例合并先天性心臟病，IE臨床表現(xiàn)中最常見的仍然是發(fā)熱908％。心臟多譜勒超聲發(fā)現(xiàn)贅生物48例，檢出率632％，2004年后贅生物檢出率較2003年前贅生物檢出率明顯提高P005。血培養(yǎng)陽性38例，陽性率50％，血培養(yǎng)陽性率2006年后較2005年前增高P005。IE中位居前3位的病原是草綠色鏈球菌579％、凝固酶陰性葡萄球菌184％、金黃色葡萄球菌132％。76例患兒治愈51例，12例單純接受抗生素治療獲痊愈，39例經(jīng)抗生素聯(lián)合外科手術(shù)治療獲痊愈，病死7例，血培養(yǎng)陽性者的預(yù)后顯著優(yōu)于血培養(yǎng)陰性者P005。2手術(shù)治療IE中12例患者的贅生物經(jīng)分子生物學(xué)檢測病原，其中11例IE患者心內(nèi)膜標(biāo)本的分子生物學(xué)結(jié)果為陽性，與相對(duì)應(yīng)的8例陽性血培養(yǎng)結(jié)果比較，7例PCR結(jié)果與血培養(yǎng)結(jié)果一致。結(jié)論1先天性心臟病是兒童IE最主要的易患因素，心臟贅生物檢出率與血培養(yǎng)陽性率逐年增高，兒童IE的病原菌仍以草綠色鏈球菌最常見，但先心術(shù)后罹患IE者與術(shù)前罹患IE者的致病菌譜發(fā)生了變化，提高血培養(yǎng)的陽性率可以改善IE的預(yù)后。2PCR方法是一種快速、靈敏、可靠的診斷病原菌的方法，適用于血培養(yǎng)陰性、生長緩慢或鑒別困難的細(xì)菌感染的、符合手術(shù)指征IE的病原學(xué)診斷，有利于指導(dǎo)手術(shù)后抗菌藥物的應(yīng)用及提高IE的最終治愈率。

簡介：學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重說明所呈交的學(xué)術(shù)論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。文中依法引用他人的成果、對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作出明確標(biāo)注或得到許可。論文內(nèi)容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他學(xué)位申請(qǐng)的論文或成果。本人如違反上述聲明，愿意承擔(dān)以下責(zé)任和后果1交回學(xué)校授予的學(xué)位證書；2學(xué)?？稍谙嚓P(guān)媒體上對(duì)作者本人的行為進(jìn)行通報(bào)；3本人按照學(xué)校規(guī)定的方式，對(duì)因不當(dāng)取得學(xué)位給學(xué)校造成的名譽(yù)損害，進(jìn)行公開道歉。4本人負(fù)責(zé)因論文成果不實(shí)產(chǎn)生的法律糾紛。論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬廣州醫(yī)學(xué)院及附屬單位。廣州醫(yī)學(xué)院及附屬單位享有任何方式發(fā)表、復(fù)制、公開閱覽、借閱以及申請(qǐng)專利等權(quán)利。本人離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，署名單位仍然為廣州醫(yī)學(xué)院及附屬單位。任何其他收存和保管本論文的單位和個(gè)人，未經(jīng)本論文作者、導(dǎo)師授權(quán)，不得將本論文轉(zhuǎn)借他人、復(fù)制、抄錄或其他任何方式傳播，否則，引起有礙作者的著作權(quán)益問題，將會(huì)追究相應(yīng)的法律責(zé)任。論文作者簽名日期年月日導(dǎo)師簽名日期年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明1、學(xué)?？梢员Ａ舯緦W(xué)位論文的原件及復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)印手段保存、匯編學(xué)位論文；2、本人授權(quán)學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。送交學(xué)位論文時(shí)間選擇（請(qǐng)?jiān)谙旅嫦鄳?yīng)欄內(nèi)打“√”）①答辯后即可送是□否□②延遲一年后送□③延遲二年后送□④延遲三年后送□論文作者簽名日期年月日導(dǎo)師簽名日期年月日目錄縮略語表I中文摘要1英文摘要5第1章前言9第2章材料與方法12第3章結(jié)果17第4章討論29第5章結(jié)論37附圖38參考文獻(xiàn)48綜述52參考文獻(xiàn)57附錄一60致謝62

簡介：背景關(guān)節(jié)軟骨損傷在臨床中極為普遍常見的原因?yàn)殛P(guān)節(jié)創(chuàng)傷、退行性變兩類既往研究主要集中于退行性軟骨損傷及隨后發(fā)生的軟骨下骨的修復(fù)機(jī)制而對(duì)于急性損傷后軟骨下骨的組織、形態(tài)研究甚是少見本研究旨在觀察關(guān)節(jié)軟骨急性損傷后軟骨下骨的早期變化探討其可能的發(fā)生機(jī)制為治療軟骨損傷提供依據(jù)。目的探討軟骨急性損傷后軟骨下骨的早期組織形態(tài)學(xué)、分子生物、生物力學(xué)的變化。材料和方法1健康成年新西蘭兔24只隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組建立股骨頭軟骨缺損模型2分別收集術(shù)后即刻、4天、7天、14天標(biāo)本大體觀察造模后的軟骨形態(tài)變化免疫印跡測定軟骨缺損區(qū)周圍軟骨蛋白聚糖、番紅固綠染色觀察軟骨下骨微觀形態(tài)變化、免疫組化法測定骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物OPGRANKL的表達(dá)3MICROCT掃描分析軟骨下骨超微結(jié)構(gòu)改變、力學(xué)檢測法評(píng)估軟骨下骨機(jī)械強(qiáng)度變化。結(jié)果可見股骨頭缺損模型于術(shù)后7天出現(xiàn)軟骨缺損面積明顯擴(kuò)大深度增加缺損區(qū)周圍軟骨蛋白聚糖含量明顯降低呈退變表現(xiàn)利用染色法觀測進(jìn)一步證實(shí)了7天起軟骨下骨骨小梁吸收連續(xù)性中斷。利用免疫組化及免疫熒光發(fā)現(xiàn)術(shù)后714天軟骨下骨中OPG表達(dá)明顯減少RANKL表達(dá)量顯著增加OPGRANKL比值降低提示骨轉(zhuǎn)換減弱甚至逆轉(zhuǎn)。采用MICROCT分析發(fā)現(xiàn)術(shù)后7天及術(shù)后14天軟骨下骨的骨小梁數(shù)量減少骨小梁厚度及間距增大?？箟毫W(xué)試驗(yàn)分析抗壓強(qiáng)度和彈性模量未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論軟骨損傷后軟骨下骨可在早期7天后即發(fā)生顯著組織形態(tài)變化和骨轉(zhuǎn)換能力的下調(diào)從而導(dǎo)致軟骨進(jìn)一步破壞術(shù)后2周內(nèi)未見軟骨下骨從在明顯力學(xué)改變基于此的修復(fù)手段可為軟骨損傷修復(fù)提供治療靶點(diǎn)。

簡介：第一部分目的分化抑制蛋白（ID）家族在細(xì)胞增殖、分化、以及腫瘤發(fā)生進(jìn)展過程中均有重要作用。本研究對(duì)該家族蛋白的N端序列進(jìn)行保守性結(jié)構(gòu)分析并構(gòu)建其基因突變體。方法應(yīng)用CLUSTALX181軟件對(duì)ID蛋白家族中三個(gè)成員（ID13）的N端序列進(jìn)行同源性分析；SWISSPDBVIEWER37SP5軟件模擬高同源區(qū)域中關(guān)鍵性氨基酸突變前后的三維結(jié)構(gòu)模型；以PCR方法將突變點(diǎn)引入ID序列，通過重疊PCR方法擴(kuò)增出全長編碼序列；酶切與測序確證突變序列的準(zhǔn)確性。結(jié)果ID13蛋白的N端存在一個(gè)由11個(gè)氨基酸形成的高度保守的旋轉(zhuǎn)螺旋（LOOPHELIX）結(jié)構(gòu)，將其中最保守的絲氨酸與亮氨酸分別突變?yōu)楦拾彼崤c纈氨酸；成功構(gòu)建包含突變ID基因序列的PGEX原核表達(dá)載體。結(jié)論本研究在ID13蛋白N端識(shí)別了一個(gè)保守的LOOPHELIX結(jié)構(gòu)，為深入研究其協(xié)同的功能特征提供了結(jié)構(gòu)依據(jù)；構(gòu)建的突變其中的絲氨酸表達(dá)載體為研究ID蛋白磷酸化修飾和功能奠定基礎(chǔ)。第二部分目的兒茶素家族化合物作為一種毒副作用小、價(jià)格低廉的天然化合物，已顯示出對(duì)艾滋病毒的抑制效果，但其抑制機(jī)理仍不明確。本研究探討兒茶素家族化合物對(duì)于HIV1整合酶的抑制效果，初步闡明該家族化合物對(duì)艾滋病毒的抑制機(jī)理。方法采用ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測四種帶有沒食子?；膬翰杷貙?duì)于HIV1整合酶的抑制力。將這四種兒茶素按照等比例混合，檢測它們協(xié)同抑制的效果，同時(shí)選擇一種無沒食子?；膬翰杷谽C作為對(duì)照。采用分子對(duì)接的計(jì)算機(jī)模擬方法研究沒食子?；膬翰杷貙?duì)于HIV1整合酶的抑制機(jī)理。結(jié)果通過ELISA實(shí)驗(yàn)方法，發(fā)現(xiàn)四種含有沒食子?；膬翰杷?，包括CATECHINGALLATECG，表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EPIGALLOCATECHINGALLATE，EGCG），GALLOCATECHINGALLATEGCG，和表兒茶素沒食子酸酯（EPICATECHINGALLATEECG）對(duì)HIV1整合酶有顯著的抑制效果。通過分子對(duì)接的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HIV1整合酶沒有結(jié)合病毒DNA的時(shí)候，這四種兒茶素會(huì)結(jié)合在TYR143和GLN148氨基酸上，因此改變了整合酶環(huán)狀結(jié)構(gòu)（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低了整合酶的活性。此外，當(dāng)整合酶與病毒DNA結(jié)合上之后，這四種兒茶素可以結(jié)合在整合酶與病毒DNA之間，從而干擾其整合效率。并且，這四種兒茶素具有很高的協(xié)同抑制效果，通過ELISA實(shí)驗(yàn)方法測定的四種藥物的混合物對(duì)整合酶的半數(shù)抑制濃度（IC5001ΜMOLL）優(yōu)于已用于臨床的整合酶抑制劑RALTEGRAVIR。結(jié)論發(fā)現(xiàn)四種含沒食子?；鵆G、EGCG、GCG，ECG的兒茶素對(duì)HIV1整合酶有顯著的抑制效果其作用機(jī)制為兒茶素結(jié)合在TYR143和GLN148氨基酸上，改變整合酶環(huán)狀結(jié)構(gòu)（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低整合酶的活性。四種兒茶素具有很高的協(xié)同抑制效果，其混合物對(duì)整合酶的半數(shù)抑制濃度為（IC5001ΜMOLL），表明含沒食子?；膬翰杷赜型蔀橐环N新的HIV1整合酶抑制劑。第二部分目的分化抑制蛋白（ID）家族在細(xì)胞增殖、分化、以及腫瘤發(fā)生進(jìn)展過程中均有重要作用。對(duì)該家族蛋白的N端序列進(jìn)行保守性結(jié)構(gòu)分析并構(gòu)建其基因突變體。方法應(yīng)用CLUSTALX181軟件對(duì)ID蛋白家族中三個(gè)成員（ID13）的N端序列進(jìn)行同源性分析；SWISSPDBVIEWER37SP5軟件模擬高同源區(qū)域中關(guān)鍵性氨基酸突變前后的三維結(jié)構(gòu)模型；先用PCR方法將突變點(diǎn)引入ID序列，再通過重疊PCR方法擴(kuò)增出全長編碼序列；酶切與測序確證突變序列的準(zhǔn)確性。結(jié)果ID13蛋白的N端存在一個(gè)由11個(gè)氨基酸形成的高度保守的旋轉(zhuǎn)螺旋（LOOPHELIX）結(jié)構(gòu)，將其中最保守的絲氨酸與亮氨酸分別突變?yōu)楦拾彼崤c纈氨酸；將突變后的ID基因序列重組到PGEX原核表達(dá)載體中。結(jié)論本研究在ID13蛋白N端識(shí)別了一個(gè)保守的LOOPHELIX結(jié)構(gòu)，為深入研究其協(xié)同的功能特征提供了結(jié)構(gòu)依據(jù)；突變其中的絲氨酸為研究ID蛋白潛在的磷酸化修飾及相應(yīng)功能特征的改變奠定了基礎(chǔ)。第三部分目的兒茶素家族化合物作為一種毒副作用小，價(jià)格低廉的天然化合物已經(jīng)體現(xiàn)出了對(duì)艾滋病毒的抑制效果，但其抑制機(jī)理仍不明確。為此研究了兒茶素家族化合物對(duì)于HIV1整合酶的抑制效果，闡述了該家族化合物對(duì)艾滋病毒的抑制機(jī)理。方法我們采用了ELISA實(shí)驗(yàn)方法檢測四種帶有沒食子?；膬翰杷貙?duì)于HIV1整合酶的抑制力。并且我們還將這四種兒茶素按照等比例混合，檢測它們協(xié)同抑制的效果。此外，我們選擇了一種最主要的不帶沒食子酰基的兒茶素EC，作為對(duì)照。我們還采用了分子對(duì)接的計(jì)算機(jī)模擬方法研究了帶有和不帶有沒食子?；膬翰杷貙?duì)于HIV1整合酶的抑制機(jī)理。結(jié)果通過ELISA實(shí)驗(yàn)方法，發(fā)現(xiàn)四種含有沒食子?；膬翰杷?，包括CATECHINGALLATECG，表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EPIGALLOCATECHINGALLATE，EGCG），GALLOCATECHINGALLATEGCG，和表兒茶素沒食子酸酯（EPICATECHINGALLATEECG）對(duì)HIV1整合酶有顯著的抑制效果。通過分子對(duì)接的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HIV1整合酶沒有結(jié)合病毒DNA的時(shí)候，這四種兒茶素會(huì)結(jié)合在TYR143和GLN148氨基酸上，因此改變了整合酶環(huán)狀結(jié)構(gòu)（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低了整合酶的活性。此外，當(dāng)整合酶與病毒DNA結(jié)合上之后，這四種兒茶素可以結(jié)合在整合酶與病毒DNA之間，從而干擾其整合效率。并且，這四種兒茶素具有很高的協(xié)同抑制效果，通過ELISA實(shí)驗(yàn)方法測定的四種藥物的混合物對(duì)整合酶的半數(shù)抑制濃度（IC5001ΜMOLL）優(yōu)于已用于臨床的整合酶抑制劑RALTEGRAVIR。結(jié)論發(fā)現(xiàn)四種含有沒食子?；膬翰杷?，包括CG、EGCG、GCG，ECG對(duì)HIV1整合酶有顯著的抑制效果。其作用機(jī)制為四種兒茶素結(jié)合在TYR143和GLN148氨基酸，改變了整合酶環(huán)狀結(jié)構(gòu)（GLY140GLY149）的柔韌性，從而降低整合酶的活性。四種兒茶素具有很高的協(xié)同抑制效果，其混合物對(duì)整合酶的半數(shù)抑制濃度為（IC5001ΜMOLL），表明有沒食子?；膬翰杷赜型蔀樾碌囊蛔錒IV1整合酶抑制劑。

簡介：分類號(hào)學(xué)號(hào)D201178354學(xué)校代碼10487密級(jí)博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文腦腫瘤的分子生物學(xué)行為與功能腦腫瘤的分子生物學(xué)行為與功能磁共振成像的相關(guān)性研究磁共振成像的相關(guān)性研究學(xué)位申請(qǐng)人人江晶晶江晶晶學(xué)科專業(yè)業(yè)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)老師師朱文珍朱文珍教授教授答辯日期期2014年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，本學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果的總結(jié)。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本人將承擔(dān)本聲明引起的一切法律后果。學(xué)位論文作者簽名日期年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后使用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名指導(dǎo)老師簽名日期年月日日期年月

簡介：一青蒿琥酯對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞FAS、FASLMRNA表達(dá)的影響目的探討青蒿琥酯對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞HFLI凋亡的作用及其與FAS、FASL表達(dá)的關(guān)系為青蒿琥酯防治肺纖維化提供理論依據(jù)。方法采用CCK8法檢測青蒿琥酯對(duì)體外培養(yǎng)的HFLI細(xì)胞增殖的影響流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率RTPCR法測定FAS、FASL的MRNA表達(dá)水平。結(jié)果青蒿琥酯呈濃度依賴性抑制HFLI細(xì)胞增殖HFLI細(xì)胞經(jīng)青蒿琥酯作用后凋亡率明顯增加P結(jié)論青蒿琥酯具有抗肺纖維化作用可能機(jī)制為通過上調(diào)FAS、FASL的表達(dá)抑制HFLI細(xì)胞增殖、促進(jìn)HFLI細(xì)胞凋亡。二青蒿琥酯對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞CASPASE3MRNA及CASPASE3相關(guān)蛋白表達(dá)的影響目的研究青蒿琥酯對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞HELF系HFLI細(xì)胞體外生長的影響為青蒿琥酯抗纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用CCK8法檢測青蒿琥酯對(duì)體外培養(yǎng)的HFLI細(xì)胞生長的影響用流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡率RTPCR法測定凋亡相關(guān)蛋白CASPASE3的MRNA表達(dá)水平WESTERNBLOTING法分析CASPASE3蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果青蒿琥酯呈濃度依賴性抑制HFLI細(xì)胞增殖HFLI細(xì)胞經(jīng)青蒿琥酯作用后凋亡率明顯增加P結(jié)論青蒿琥酯很可能通過上調(diào)CASPASE3MRNA及蛋白的表達(dá)水平進(jìn)而抑制HFLI細(xì)胞的增殖并促進(jìn)HFLI細(xì)胞的凋亡從而發(fā)揮抗肺纖維化作用。

簡介：點(diǎn)擊查看更多狂犬病病毒CTN不同克隆株的生物學(xué)和分子特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號(hào)墅Z壘魚2UDCO重慶醫(yī)科大學(xué)密級(jí)碩士學(xué)位論文論文題目作者姓名轉(zhuǎn)化生長因子PL在結(jié)腸癌細(xì)胞中分子生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究T日皇J名、指導(dǎo)教師姓名職稱、單位名稱姜政教授重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士論文答辯年月學(xué)科、專業(yè)名稱2010年5月內(nèi)科學(xué)2010年5月目錄符號(hào)說明????????????????????????????????．1中文摘要????????????????????????????????2英文摘要???????????????????????????????。4論文正文轉(zhuǎn)化生長因子PL在結(jié)腸癌細(xì)胞中分子生物學(xué)行為的實(shí)驗(yàn)研究???8前言??????????????????????????????????????????8第一部分TGFBL真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在COS．7細(xì)胞中的表達(dá)?????LO1材料和方法?????????????????????????．．．??102實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????????。203討論????????????????????????????????????21第二部分PSHRNATGFILI表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其有效序列的篩選??????。231材料和方法????????????????????????????232實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????????263討論????????????????????????????????????26第三部分PEGFPNITGFIH與PSHRNATGF．PL重組質(zhì)粒對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，周期及侵襲性的不同影響?????????????????????。281材料和方法???????????????????????????282實(shí)驗(yàn)結(jié)果????????????????????????????303討論????????????????????????????????????3L全文總結(jié)????????????????????????????????33參考文獻(xiàn)????????????????????????????????34附圖???????????????????????????????37文獻(xiàn)綜述?????????????????????????????????．46駕C謝????????????????????????????????????????54攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文?????????????????????????55

簡介：CFTRCYSTICFIBROSISTRANSMEMBRANECONDUCTANCEREGULAT，CFTR即囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子，是一種CAMP依賴的CL通道，廣泛表達(dá)于呼吸道、胰腺、胃腸道、睪丸、汗腺和唾液腺等多種分泌型和吸收型上皮，主要參與電解質(zhì)、液體轉(zhuǎn)運(yùn)以及調(diào)節(jié)其它膜通道蛋白的功能。其基因突變導(dǎo)致白種人中常見的致死性常染色體隱性遺傳疾病即囊性纖維化病CYSTICFIBROSIS，CF。其中最為常見的突變類型是△F508第508位氨基酸苯丙氨酸缺失，有90％的CF病人其一條染色體都攜有△F508突變。CF疾病的主要特征是反復(fù)的肺部感染、結(jié)構(gòu)破壞和纖維修復(fù)，最終導(dǎo)致肺功能不可逆性的喪失，這也是CF疾病高發(fā)病率和致死性的主要原因。由于缺少合適的動(dòng)物模型，CF發(fā)病機(jī)理并不清楚。盡管在CFTR基因克隆后，建立了許多CF小鼠轉(zhuǎn)基因模型，并且這些小鼠也重現(xiàn)了CF病人的腸道病變。但由于小鼠與人在氣道細(xì)胞生物學(xué)、粘膜下腺表達(dá)量以及小鼠氣道可能存在其它的非CFTR介導(dǎo)的氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)，CF轉(zhuǎn)基因小鼠模型未能表現(xiàn)作為CF病人主要致死原因的肺部病變。因此，需要尋找其它的動(dòng)物建立CF模型。豬在解剖學(xué)、生理學(xué)上和人有極大的相似性，比較適合建立CF動(dòng)物模型。此外，由于豬具有較長的壽命，使得對(duì)于CF肺疾病的發(fā)生、治療手段的長期治療效果以及副作用的研究成為可能。現(xiàn)在很多研究者致力于構(gòu)建豬CFTR基因敲除豬和△F508突變豬CF模型。但由于基因敲除豬也可能發(fā)生類似于基因敲除鼠的腸梗阻，在未發(fā)生肺部疾病前過早死亡，使后續(xù)研究難以進(jìn)行。此外，我們實(shí)驗(yàn)室和美國OSTEDGAAD等的近期研究發(fā)現(xiàn)，豬△F508CFTR在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型中能夠正常加工成熟轉(zhuǎn)運(yùn)到質(zhì)膜，提示豬△F508轉(zhuǎn)基因模型將不會(huì)出現(xiàn)預(yù)期的表型。用CFTR特異性抑制劑誘導(dǎo)豬CF模型是另一個(gè)可行的策略。但現(xiàn)今發(fā)現(xiàn)的人CFTR特異性抑制劑CFTRINH172對(duì)豬CFTR的親和力差，抑制效果并不明顯，并且本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，該藥不能誘導(dǎo)豬CF模型的產(chǎn)生。另一種CFTR抑制劑GLYH101雖然對(duì)豬有較好的抑制效果，但其在動(dòng)物體內(nèi)分布和代謝情況并不清楚，是否適合用來做藥物誘導(dǎo)豬CF模型也不清楚。因此，需要尋找高親和力、高特異性、在豬體內(nèi)主要CF病變器官分布較高的豬CFTR抑制劑來誘導(dǎo)豬CF模型。本文的目的是系統(tǒng)研究豬△F508CFTR的細(xì)胞生物學(xué)和電生理特征，并通過高通量篩選發(fā)現(xiàn)新的豬CFTR特異性、高親和力抑制劑，為建立豬CF藥理模型奠定基礎(chǔ)。首先利用PCR方法我們獲得了豬CFTR基因，并將其連入真核表達(dá)載體PCDNA31ZEO。對(duì)豬CFTR基因進(jìn)行點(diǎn)突變，獲得了豬△F508CFTR，也將其連入真核表達(dá)載體PCDNA31ZEO。將這兩個(gè)構(gòu)建好的重組質(zhì)粒與對(duì)碘離子敏感的綠色熒光蛋白突變體EYFPH148QI152L穩(wěn)定轉(zhuǎn)染FRTFISHER大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞，建立了豬CFTR高通量篩選細(xì)胞模型。利用自己制備的針對(duì)豬CFTRNBD2結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體，對(duì)瞬時(shí)及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染野生型和△F508PCFTR的COS7細(xì)胞及FRT細(xì)胞進(jìn)行免疫印記及免疫熒光分析，發(fā)現(xiàn)△F508PCFTR蛋白大部分778％都具有成熟型糖基化形式，能夠被正常轉(zhuǎn)運(yùn)上膜。通過CL電流熒光測定、短路電流分析以及全細(xì)胞膜片鉗電流測定，發(fā)現(xiàn)△F508PCFTR具有依賴于CAMP激活的CL轉(zhuǎn)運(yùn)功能。較野生型相比，△F508PCFTR對(duì)CAMP激動(dòng)劑FSKOLIN的敏感性降低10倍EC505ΜMVSEC5005ΜM；其FSKOLIN激活的最大電流為野生型的61％；對(duì)人CFTR抑制劑CFTRINH172和GLYH101的靈敏性更高，1ΜMCFTRINH172對(duì)△F508PCFTR和野生型CFTR的抑制百分率分別為40％和20％。這些結(jié)果都表明豬△F508突變是一種“溫和性”突變，突變蛋白能正常轉(zhuǎn)運(yùn)到達(dá)頂質(zhì)膜，只是功能較野生型有所降低。以往的研究表明，10％的人△F508CFTR轉(zhuǎn)運(yùn)到達(dá)頂質(zhì)膜就可以避免CF癥狀的發(fā)生，因此△F508轉(zhuǎn)基因豬CF模型不會(huì)出現(xiàn)預(yù)期表型。此外，對(duì)GLYH10L在小鼠體內(nèi)的分布、代謝情況進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)其在小鼠肺內(nèi)分布并不明顯，并很快被清除干凈。據(jù)此我們推斷其在豬體內(nèi)也具有類似分布代謝情況，提示GLYH101并不適合作為藥物來誘導(dǎo)豬CF模型。因此，需要尋找對(duì)豬更有效的特異性抑制劑。利用構(gòu)建的FRTEYFPH148Q1152LPCFTR穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型，通過高通量篩選技術(shù)對(duì)含10萬個(gè)結(jié)構(gòu)多樣的小分子組合化學(xué)庫進(jìn)行抑制劑的篩選，發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新的豬CFTR特異性抑制劑。其中活性最好的PI1，能夠以劑量依賴的方式抑制FRT單層上皮細(xì)胞CPTCAMP激活的豬CFTR短路電流，其IC50為1334ΜM，且這種作用具有快速、可逆、無毒的特點(diǎn)。在小鼠體內(nèi)活性試驗(yàn)中，可有效抑制霍亂毒素誘導(dǎo)的腸道液體分泌80％。通過以上研究，進(jìn)一步證實(shí)豬△F508突變CFTR的細(xì)胞生物學(xué)行為與人△F508PCFTR有顯著差異，提示豬△F508轉(zhuǎn)基因模型將不會(huì)出現(xiàn)預(yù)期的表型。此外，我們對(duì)10萬個(gè)小分子組合化學(xué)庫篩選，發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新結(jié)構(gòu)的豬CFTR抑制劑，但其親和力不高，提示我們從小分子組合化學(xué)庫獲得豬CFTR高親和力的抑制劑可能性不大。下一步計(jì)劃對(duì)本實(shí)驗(yàn)室近期從500種常用中草藥建立的一個(gè)含40000個(gè)組分的小分子庫進(jìn)行系統(tǒng)篩選，從結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜多樣的天然產(chǎn)物中尋找豬CFTR的高親和力、特異性抑制劑。

簡介：本研究采用了一種較為簡單的聚合酶鏈反應(yīng)－限制性酶切片段多態(tài)性POLYMERASECHAINREACTIONRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMPHISM，PCRRFLP方法對(duì)臨床耐藥結(jié)核桿菌菌株中的KATG基因最為常見的S315T突變進(jìn)行了篩選，并對(duì)未發(fā)現(xiàn)S315T突變的耐異煙肼結(jié)核桿菌的KATG基因直接測序以研究KATG的基因變異。此外，還應(yīng)用直接測序法對(duì)RPOB基因的突變情況作了分析。除對(duì)異煙肼與利福平耐藥相關(guān)基因譜作分析外，還采用一種新的多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析法MULTIPLELOCIVARIABLENUMBEROFTEMREPEATSANALYSIS，MLVA方法對(duì)結(jié)核分枝桿菌的基因指紋作了分析，對(duì)該方法在我國的應(yīng)用情況作了初步探討，并研究基因型與耐藥性之間的關(guān)系。在以上工作的基礎(chǔ)上，本研究第二部分建立了基因特異性多重聚合酶鏈反應(yīng)MULTIPLEXALLELESPECIFICPOLYMERASECHAINREACTION，MASPCR以檢測臨床常見的KATG基因和RPOB基因突變，用于對(duì)異煙肼和利福平耐藥菌的快速檢測。

簡介：目的通過對(duì)血管內(nèi)皮功能NO、ET、VEGF、血小板活化功能CD62P、CD63等的檢測和分析，從微觀分子生物學(xué)角度探討“血瘀“是老年性骨質(zhì)疏松的主要病機(jī)之一。對(duì)30例老年性骨質(zhì)疏松癥患者（A組）、30例低骨量老年患者（B組），進(jìn)行骨密度BMD，血清NO、VEGF，血漿ET、CD62P、CD63等檢測。NO檢測采用硝酸還原酶法，ET檢測采用放射免疫法，VEGF采用雙抗夾心ELISA法，CD62P、CD63采用單克隆抗體和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測，同時(shí)檢測30例健康青壯年（C組）作為對(duì)照，并將三組的NO、ET、VEGF、CD62P、CD63和骨密度進(jìn)行相關(guān)系數(shù)分析。結(jié)果1A、B、C三組間的骨密度（T值）差異具有顯著性P2A組NO、ET水平與C組比較差異具有顯著性P3A組VEGF水平與C組比較差異具有顯著性P4A組CD62P、CD63水平與C組比較差異具有顯著性P5A、B、C三組的NO、ET、VEGF、CD62P、CD63與BMD均具有非常顯著性相關(guān)P結(jié)論1老年性骨質(zhì)疏松屬中醫(yī)“骨痿”、“骨痹”范疇，是伴隨人體的衰老而發(fā)生的疾病，老年性骨質(zhì)疏松患者由于其生理病理過程的原因，血瘀在其發(fā)病中起著重要作用。2老年性骨質(zhì)疏松患者存在血管內(nèi)皮功能NO、ET、VEGF、血小板活化功能CD62P、CD63等微觀分子生物學(xué)變化，其微觀分子生物學(xué)的改變可能參與老年性骨質(zhì)疏松的發(fā)病。3隨著年齡的增加，人體NO、ET、VEGF、CD62P、CD63的變化和骨密度改變有一定的關(guān)系。