簡介：分類號____________密級______________ＵＤＣ____________單位代碼______________碩士學位論文論文題目傳染性皮下及造血組織壞死病毒分子流行病學調查研究學號_________________________姓名_________________________專業(yè)名稱_________________________學院_________________________指導教師___________________________________________________________________________論文提交日期2016年5月25日范東東116461311075036生物化學與分子生物學海洋學院陳炯獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得寧波大學或其他教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實之處，本人愿意承擔相關法律責任。簽名___________日期____________關于論文使用授權的聲明關于論文使用授權的聲明本人完全了解寧波大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨热荩梢圆捎糜坝?、縮印或其他復制手段保存論文。（保密的論文在解密后應遵循此規(guī)定）（保密的論文在解密后應遵循此規(guī)定）簽名___________導師簽名___________日期____________

簡介：分類號分類號S85828授予學位單位代碼授予學位單位代碼10434編號Z2013173山東農業(yè)大學碩士專業(yè)學位論文德州德州地區(qū)新型鵝細小病毒地區(qū)新型鵝細小病毒流行病學調查及流行病學調查及DZDZ0101株新型鵝株新型鵝細小病毒細小病毒全基因組序列分析全基因組序列分析THEEPIDEMICINVESTIGATIONABOUTNOVELGOOSEPARVOVIRUSINDEZHOUANDTHECOMPLETEGENOMEANALYSISOFANOVELGOOSEPARVOVIRUSDZ012016年12月9日姓名姓名吳蓓吳蓓學位類別學位類別獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士領域領域獸醫(yī)獸醫(yī)研究方向研究方向分子病分子病原學原學學院學院動物科技學院動物科技學院指導教師指導教師姜世金姜世金教授教授關于學位論文原創(chuàng)性和使用授權的聲明本人所呈交的學位論文，是在導師指導下，獨立進行科學研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責任由本人承擔。本人完全了解山東農業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留和按要求向國家有關部門或機構送交論文紙質本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權山東農業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文，同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。論文作者簽名導師簽名日期

簡介：Y9275‘0”E學位論文＆N日自‰～表征健康鵝群新城疫病毒的分離及生物學特性研究陳露精導彀帥呈室孟塾掛，塹劌盤塋堅蒸塑劌，22』QQ申請學位級別』L±一學科專業(yè)名稱垂墮蘭匡芏論文提交日期三螋￡生』且一論文答辯日期2QQ§生§目學位授予單位J業(yè)型繭L一學位授予日期2Q豎生§旦答辯委員會主席盔垂建燃論文評閱人型堅雖熬蕉韭圭鴦絲蕉00六年五月2塹叢查蘭墅主堂些墮苧SDL41041GO的MDT為110．2．192．0H，ICPI為O．1010，43L，被判定為NDV弱毒株；3株病毒SD／I／04／GO、SD／6／04／GO和JS／I／05／GO的MDT為84．889．4H，ICPI為O．8400．966，被判定為NDV中等毒力毒株兩株病毒JS／I／03／GO和SD／5／04／GO的MDT為53．154．6H，ICPI為1．7801．820，被判定為NDV強毒株。2鵝源新城疫病毒融合蛋白基因部分片段的克隆及序列分析用RTPCR技術擴增、克隆了上述1L株鵝源NDVF基因部分片段，經測序獲得F基因5’端EDNA前1700NT全長1705NT序列，分析測定的序列及由其推導的氨基酸序列。結果表明，6株病毒SD／I／03／GO、AH／I／04／GO、JS／I／04／GO、SD／2／04／GO、SD／3／04／GO和SD／4／04／GOF蛋白裂解位點序列為112GROG．RL117，符合典型的NDV弱毒株特征；5株病毒SD／I／04／GO、SD／6／04／GO、JS／I／05／GO、JS／I／03／GO和SD／5／04／GOF蛋白裂解位點序列均為112RRQKRF117，符合典型的NDV強毒株特征。將11株鵝源NDVF基因編碼區(qū)1654BP核苷酸序列與新城疫標準毒株及近年來國內外分離的鵝源或雞源NDV相應序列進行比較。結果表明，6個弱毒株和3個中等毒力毒株之間的同源性大于97％，兩株強毒與其他9株病毒的同源性為90．3％．92．1％。根據(jù)核苷酸序列推導出相應的551個氨基酸序列，6個弱毒株及3個中等毒力毒株之間的同源性高達97．1％．97．5％，兩株強毒與其他9株病毒的同源性為91．8％．93．5％。近年來國內部分雞源分離株與6個弱毒株和3個中等毒力毒株相應氨基酸序列的同源性超過96％，而11株病毒與1997年以來國內分離到的對鵝具有高度致病性的NDV相應序列的同源性最高僅為94．7％。另外，對F蛋白信號肽區(qū)和F蛋白N一未端27個高變氨基酸位點的比較表明，從外表健康鵝分離的11株鵝源NDV，不管是弱毒株、中等毒力毒株還是強毒株，都在相應位點上和某些雞源毒株有很高的相似性。以F基因高變區(qū)374NT片段第47～420NT為基礎，用軟件繪制遺傳發(fā)生樹，發(fā)現(xiàn)6個弱毒株靠得很近，與基因II型的LASOTA株同處1個分支3個中等毒力毒株與基因II型的TEXASGB株共同位于另一個分支；兩個強毒株則與近年來分離自發(fā)病鵝群的部分VLLD亞型毒株共同形成另一個分支。對F蛋白7個特征性氨基酸位點的比較、分析發(fā)現(xiàn)，6株弱毒及3個中等毒力毒株與LASOTA株、F48E8株分別在7個和6個位點具有完全相同的氨基酸殘基兩個強毒株的前4個位點與從

簡介：獨鉍性聲驤本人聲明，所呈交的學位論文，是在指導教師指導下，通過我的努力取得的成果，并且是自己撰寫盼。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中已經作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含在江西農業(yè)大學或其它教育機構獲得學位或證書而使用過的材料。與我一I可對本研究做出貢獻媳阿志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴重侵犯他人知識產權蝴亍為，由本人承擔應有盼責任。學位論文作者親筆簽名弛日期C鹼L厶壘些論文使用授權的說明本人完全了解江西農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閩和借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨热?，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權書?？诓槐Ｃ?，本學位論文屬于不保密。0請在方框內打“妒’學位論文作者親筆簽名拖蟲昆日期＆旦』61篁指導教師親筆簽名目辮塑≤≤纊目錄19病毒分離14110動物接種試驗15111細胞培養(yǎng)151111細胞復蘇151112細胞凍存15112病毒感染細胞一15113PRVTCID50的測定15114病毒的鑒定151141細胞CPE151142培養(yǎng)細胞的PCR鑒定161143感染細胞超薄切片的制作一162結果與分析1621病毒PCR鑒定結果1622動物接種試驗1723病毒的分離及鑒定18231細胞CPE18232培養(yǎng)細胞的PCR鑒定18233感染細胞的電鏡觀察1924病毒TCIDSO的測定一203討論204小結一21第四章犬源偽狂犬病毒江西株GD、GE基因的克隆與測序分析221材料與方法2211主要生化試劑2212主要儀器設備2213常用試劑的配制2214引物設計2315PRVDNA模板的制備一2316毒力基因的PCR擴增2317目的片段的克隆23171PCR產物的回收23172目的片段與克隆載體的連接2418連接產物轉化24181重組質粒的轉化24182陽性菌落的篩選、鑒定24183重組質粒的提取24184目的片段測序和序列分析252結果與分析2521PRV江西株GD基因的PCR擴增2522PRV江西株GE基因的PCR擴增一2523PRV江西株GD基因分析25231PRV江西株GD基因核苷酸及編碼的氨基酸序列分析25232PRVGD基因遺傳進化分析29

簡介：河南農業(yè)大學專業(yè)專業(yè)碩士學位論文碩士學位論文題目華南地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學及HY毒株分離鑒定研究學位申請人姓名王培培導師姓名宋長緒研究員夏平安教授夏平安教授專業(yè)學位類別獸醫(yī)碩士領域預防獸醫(yī)學研究方向畜禽疫病分子病原學中國鄭州2016年6月河南農業(yè)大學2016屆碩士畢業(yè)論文河南農業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明、使用授權及知識產權歸屬承諾書河南農業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明、使用授權及知識產權歸屬承諾書學位論文題目華南地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學及HY毒株分離鑒定研究學位類別碩士研究生學生姓名王培培學科專業(yè)預防獸醫(yī)學導師姓名宋長緒夏平安學位論文是否保密如需保密，解密時間年月日獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導師指導下進行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。特此聲明。研究生簽名導師簽名日期年月日日期年月日學位論文使用授權及知識產權歸屬學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾承諾本人完全了解河南農業(yè)大學關于保存、使用學位論文的規(guī)定，即學生必須按照學校要求提交學位論文的印刷本和電子版本；學校有權保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。本人同意河南農業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。本人完全了解河南農業(yè)大學知識產權保護辦法的有關規(guī)定，在畢業(yè)離開河南農業(yè)大學后，就在校期間從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農業(yè)大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產權均歸河南農業(yè)大學所有,否則，承擔相應的法律責任。注保密學位論文在解密后適用于本授權書。注保密學位論文在解密后適用于本授權書。研究生簽名導師簽名學院領導簽名日期年月日日期年月日日期年月日

簡介：分類號S8317單位代碼10364密級學號14720172安徽農業(yè)大學安徽農業(yè)大學學位論文安徽部分地區(qū)病雞中CAV的血清學調查及病毒分離鑒定SEROLOGICALINVESTIGATIONVIRUSISOLATIONIDENTIFICATIONOFCAVINFECTIONINDISEASEDCHICKENSINSOMEAREASOFANHUIPROVINCE研究生儲鴻蒙指導教師劉雪蘭副教授合作指導教師葉紅副教授申請學位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)領域名稱獸醫(yī)研究方向獸醫(yī)微生物與免疫學二零一六年六月摘要雞傳染性貧血病毒（CHICKENANEMIAVIRUS，CAV）主要引起雞胸腺、骨髓等免疫器官發(fā)生病變，從而導致免疫抑制，容易繼發(fā)其他病原微生物感染。我們對送檢本實驗室的病雞通過CAV抗體陽性率調查，病毒分離和動物回歸實驗等方法，初步了解安徽省部分地區(qū)發(fā)病雞群中CAV感染狀況，為防控雞傳染性貧血病提供參考。首先，本研究應用IDEXX雞傳染性貧血病病毒抗體檢測試劑盒對來自安徽省126個養(yǎng)殖場送檢的共228份雞血清進行檢測。結果顯示，126個養(yǎng)殖場中CAV抗體檢測呈陽性為7063。228份血清樣品中有145份呈CAV抗體陽性，總陽性率為6360。根據(jù)血清樣本來源顯示，皖南地區(qū)CAV抗體陽性率為60，皖中地區(qū)為6446，皖北地區(qū)為6222。不同品種雞中肉雞CAV抗體陽性率為4286、蛋雞品種為5152、土雞抗體陽性率為7083；不同日齡病雞中，150日齡CAV抗體陽性率5222，50100日齡抗體陽性率為5882，100150日齡抗體陽性率為5806，150200日齡抗體陽性率為8621，200日齡以上的抗體陽性率相對最高，為90。其次，對CAV抗體檢測陽性且肝臟出現(xiàn)腫瘤樣結節(jié)的病雞，制備病理組織切片，提取肝組織DNA，以PCR方法檢測CAV及可能混感的病毒。對2份CAV檢測陽性的病料液孵育MDCCMSB1細胞，觀察細胞病變。結果顯示，病理組織切片染色結果可見明顯的淋巴細胞浸潤；擴增結果表明CAV與ALVJ、MDV存在混合感染，從9份腫瘤中檢測出8份CAV，其中有5份和ALVJ檢測雙陽性，對其中2份腿肌出血、胸腺明顯萎縮的陽性樣品中CAV凋亡素（VP3）基因序列進行同源性分析表明，AHCHCAV1與EF176599（山東株）同源性最高為100，而AHCHCAV2與M55918（德國株）和EF17659（山東株）同源性均為994。最后，將上述PCR鑒定CAV陽性的2個樣品經氯仿和雙抗處理后孵育MDCCMSB1細胞并盲傳，在光學顯微鏡下觀察細胞病變，并提取DNA進行PCR鑒定；將細胞毒通過卵黃囊接種6DSPF雞胚，并通過腿肌注射1日齡SPF雛雞進行回歸實驗，觀察剖檢病變并通過PCR檢測CAV。結果顯示，病料液處理的MDCCMSB1細胞在第二代和第四代細胞均出現(xiàn)明顯腫脹、死亡等細胞病變。PCR檢測結果CAV為陽性；在回歸試驗中，接種13D后，少數(shù)雞胚發(fā)育明顯受阻，胚體小于對照組，但多數(shù)病變不明顯。1日齡雛雞在接種細胞毒21D時剖檢，可見腿肌明顯出血、胸腺明顯出血，部分萎縮等剖檢病變；PCR檢測結果均為CAV陽性。由此表明，我們成功分離并鑒定了2株CAV安徽毒株（分別

簡介：山東農業(yè)大學碩士學位論文豬瘟病毒致病的臨床生物學特性研究姓名徐鳳軍申請學位級別碩士專業(yè)獸醫(yī)指導教師王振勇南斗錫20051217山東農業(yè)大學頌士學位論文中文摘要隨著豬瘟疫苗的普遍應用，豬瘟HC的發(fā)病率和病死率明顯減少。近年來HC流行和發(fā)病的特點已發(fā)生了很大變化，除典型的病例外，在一些地區(qū)和豬場出現(xiàn)了一種非典型豬瘟，給養(yǎng)豬業(yè)帶來很大的經濟損失。為了探討免疫時間、免疫劑量、免疫方法等對豬瘟及非典型豬瘟發(fā)生的影響，以及豬瘟病毒的強、弱能否引起豬瘟的發(fā)生，確定比較適合的免疫程序，準確的診斷方法，避免豬瘟、非典型豬瘟造成損失，進行了本實驗。對不同免疫時間、不同免疫劑量對仔豬及母豬進行免疫，然后采集血清，應用不同的方法檢測豬瘟抗體水平。結果如下1通過流行病學、癥狀學和病理剖檢初步確診之后，再作免疫熒光試驗以進一步確診的條件下，發(fā)現(xiàn)當前非典型豬瘟普遍流行，尤其在混合感染的條件下，更是如此。免疫熒光抗體診斷技術的檢出率、特異性及敏感性很高。2應用ILIA、DOTELISA、豬瘟抗體免疫金標試紙條三種方法對150份不同階段豬血清同步進行豬瘟抗體的檢測，其中任何兩種之間檢測經產母豬、后備母豬、20日齡豬、40日齡豬以及育肥豬血清中豬瘟抗體的結果均無顯著差異P005，表明這三種方法均可用于豬瘟抗體的檢測。3不同日齡段的豬群豬瘟抗體水平差異較大，經產母豬的免疫狀況相對較好，而育肥豬和后備母豬的免疫狀況不理想，但是育肥豬在育肥階段不發(fā)生豬瘟。4通過應用豬瘟單克隆抗體純化酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測豬瘟抗體，可以確定豬場存在豬瘟病毒隱性感染。這些由低毒株引起的隱性感染豬瘟屬非典型豬瘟，可以通過垂直感染或者水平傳播。5使用豬瘟DOTELISA診斷試劑盒，具有操作簡便、快速、經濟、敏感、特異的優(yōu)點，非常適用于規(guī)模化養(yǎng)豬場豬瘟免疫檢測及流行病學調查。6疫苗保存溫度或者存放時間影響疫苗效力。防疫操作不嚴格，免疫程序不合理或免疫劑量不足，會擾亂免疫應答。藥物及營養(yǎng)影響機體免疫

簡介：分類號；癌級單位代碼10019學號S030164飛蛾差弋夭普碩士學位論文白草花葉病毒P1基因生物學功能的研究及轉激活蛋白基因煙草的培育STUDIESOILTHEBIOLOGICALFUNCTIONOFTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSANDPRODUCTIONOFTRANSGENICTOBACCOPLANTSWITHALLACTIVATORPROTEINGENE研究生匿型指導教師蓮在主熬攫申請學位類級別一盔堂亟專業(yè)名稱撞毖痘理堂研究方向擅物痘垂堂所在學院盤堂皇生毖拉苤堂院二零零六年五月中國農業(yè)大學碩士論文ABSTRACTABSTRACTSTUDIESONTHEFUNCTIONOFTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSPOTYVIRUSWEREPERFORMEDBYTRANSFORMINGTHEGENEINTONICOTIANABENTHEMIANAANDINSERTINGITINTOPVXVECTORTOBEINOCULATEDONTOⅣBENTHEMIANATHEPLANTEXPRESSIONVECTORPCAMBIAL301CARRYINGTHEP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSWASCONSTRUCTED，USINGTHE35SPROMOTERFROMVECTORPRTL03BYPSTLDIGESTIONTOBACCOLEAFDISCSWERETRANSFORMEDVIAAGROBACTERIUMTUMEFACIENSMEDIATEDPROCEDUREP1TRANSGENICTOBACCOPLANTLETSWEREOBTAINEDMOLECULARDETECTIONINDICATEDTHATTHREEOUTOFTHETWENTYTWOTRANSGENICPLANFLETSWEREPOSITIVEP1WANSGENICPLANFLETGREWWEAKERCOMPAREDWITHWILDTYPE，ANDTHELEAVESWEREMUCHSMALLERTHUSWESPECULATETHATTHEP1GENEISDELETERIOUSTOTHEGROWTHANDDEVELOPMENTOFMBENTHEMIANATHEPRODUCTIONOFP1TRANSGENICTOBACCOMAKESITPOSSIBLEFORUSTOFURTHERINVESTIGATETHEBIOLOGICALFUNCTIONSOFTHEP1GENERECOMBINANTVECTORPPVXPLWITHP1GENEOFPENNISETUMMOSAICVIRUSINSERTEDINTOP45P46WASTRANSCRIBED／NVITROANDINOCULATEDTONBENTHEMIANATHENBENTHEMIANAPLANTSINOCULATEDWITHP4SP“CONTROLAPPEAREDSLIGHTSYSTEMICMOSAICSYMPTOM，WHILETHOSEBYPPVXPISHOWEDMOTTLINGANDNECROTICRINGSPOTS，ANDNASCENTLEAVESAPPEAREDABNORMALTHESYMPTOMCAUSEDBYPPVXPLWASMORESERIOUSTHANTHATCAUSEDBYTHECONTROLP45P“P1MAYENHANCEPATHOGENICITYOFPVXWHICHSUGGESTEDSOMEFUNCTIONSOFPLPROTEININADDITION，THESYMPTOMOFPPVXPIINOCULATINGLINESAPPEAREDMUCHLATERCOMPARINGWITHCONTROL，WHICHSUGGESTEDTHATTHEEXPRESSIONOFP1PROTEINMAYDELAYTHESYSTEMICMOVEMENTOFPVXVIRUSPARTICLESANACTIVATORPROTEINGENEFROMFUNGIWHICHWASSHOWNTOENHANCEPLANTSRESISTANCEAGAINSTVIRUSWASCONSTRUCTEDWITHTHEPLANTEXPRESSIONVECTORPCAMBIAL301，ANDTRANSFORMEDINTOTOBACCOUSINGAGROBACTERIUMMEDIATEDTRANSFORMATIONAPPROACHPROLIFERATIONANDREGENERATIONOFTRANSGENICCELLSWERESELECTEDINCULTUREMEDIUMWITHHYGROMYCINBTHELEAFDISCSWERECULTIVATEDINMSMEDIUMFORTWODAYSINDARK，THENWERETRANSFERREDTOSELECTIVEMEDIUMMSIGEMMULEAPPEAREDWITHINTHREEWEEKSTHENTHEPLANILETSWERECULTIVATEDINMSI【TOINDUCEROOTFORMAFIONMORETHAN100TRANSGENICPLANTLETSHAVEBEENOBTAINEDPCRANDRTPCRANALYSISINDICATEDTHAT29OUTOFTHE30PLANTLETSRANDOMLYSAMPLEDWERETRANSGENICPLANTSTMVWASINOCULATEDTOBOTHTHETRANSGENICANDNONTRANSGENICWILDTYPEPLANTSBOTHOFTHEMSHOWEDSYSTEMICMOSAICSYMPTOM，BUTTHESYMPTOMOFTRANSGENICTOBACCOWASMUCHMILDERAMONTHLATERTHESYMPTOMBECAMESERIOUS，BUTTHELEAVESSHOWEDONLYCHLOROSISBUTNOTYELLOW。THEACTIVATORPROTEINMAYPLAYACERTAINROLEINDEFENSEATTHEBEGINNINGOFTMVINFECTIONPRODUCTIONOFTRANSGENICTOBACCOWITHACTIVATORPROTEINGENEISSIGNIFICANTFORBOTHBREEDINGTOBACCOWITHHIGHRESISTANCETOVIRESANDFURTHERINVESTIGATIONOFTHISGENEKEYWORDSPENNISETUMMOSAICVIRUS，P1GENE，TRANSGENICTOBACCO，ACTIVATORPROTEINII

簡介：趙振鵬豬流行性腹瀉病毒的流行病學調查及快速檢測方法的初步建立1摘要由豬流行性腹瀉病毒PORCINEEPIDEMICDIARRHEAVIRUS，PEDV引起的豬流行性腹瀉PORCINEEPIDEMICDIARRHEA，PED是一種急性胃腸炎疾病，其主要癥狀為水樣腹瀉和嘔吐，現(xiàn)在已經成為一種世界性傳染病。2010年我國南部大面積爆發(fā)豬流行性腹瀉疫情，各個年齡段的豬均發(fā)病，新生仔豬的發(fā)病率和死亡率都很高。為了了解近兩年該病在我國的流行病學特點和建立快速檢測方法，我們主要開展了以下研究1．豬流行性腹瀉病毒的遺傳變異分析為了調查我國豬流行性腹瀉病毒的遺傳變異情況，本研究通過RTPCR方法對從江蘇、吉林、上海、廣東、河南五省市規(guī)模豬場采集來的314份樣本進行病原學檢測，檢測出PEDV陽性病料76份，陽性率達24．2％，其中廣東省幾個豬場的PEDV陽性率最高，高達94．7％，吉林省幾個豬場沒檢出PEDV陽性，另外江蘇省、河南省和上海市的PEDV陽性率分別為17．8％、31．6％和27．6％，表明PED在我國部分地區(qū)仍流行嚴重，有必要對PED采取更加嚴格的防范措施。對部分陽性樣品中PEDV的S1、M、ORF3基因進行克隆、測序和比對分析，結果表明我國大部分流行株與韓國、美國流行株同源性較近，與歐洲流行株以及疫苗株CV777同源性較遠，只有HNL3和YM毒株與歐洲流行株和疫苗株CV777同源性較近。比對發(fā)現(xiàn)S1蛋白氨基酸發(fā)生變異明顯，M蛋白和ORF3蛋白的氨基酸較為保守，另外HNL3和YM毒株的ORF3基因與疫苗株DRL3的ORF3基因相同，有49個核苷酸缺失。2．豬流行性腹瀉病毒單克隆抗體的研制及特性鑒定為了獲得可用于建立PEDV快速檢測方法的單克隆抗體，本研究將超速離心法純化的PEDV作為免疫原，免疫6～8周齡BALB／C小鼠，利用免疫熒光法IFA篩選出9株能夠穩(wěn)定分泌抗PEDV抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為PEDV1C12、PEDV2A9、PEDV2C11、PEDV2E5、PEDV2F1、PEDV3E9、PEDV5812、PEDV6DL、PEDV6E10；隨后對單克隆抗體的腹水熒光效價、亞類以及特異性等生物學特性進行鑒定。單克隆抗體亞類鑒定結果顯示，7株單克隆抗體亞類為196，2株為I鮒；其腹水的IFA效價分別為5．12X104、1．08X104、5．12X104、2．16X104、1．08104、2．048X105、3．2X103、1．024X105、1．024X105WESTERNBBT結果表明，8株單克隆抗體是PEDVN蛋白特異性抗體，PEDV2A9有可能為針對構象表位的抗體。3．豬流行性腹瀉病毒快速檢測方法的初步建立為了建立豬流行性腹瀉病毒快速檢測方法，本研究利用檸檬酸三鈉還原法制備了粒徑30NM的膠體金溶液，采用雙抗體夾心的原理制備PEDV膠體金試紙條。即將金標抗體EPIDEMIOLOGICALINVESTIGATIONOFPEDVANDPRELIMINARYDEVELOPMENTOFRAPIDDETECTIONMETHODSABSTRACTPORCINEEPIDEMICDIARRHEAPEDCAUSEDBYPORCINEEPIDEMICDIARRHEAVIRUSPEDVWASADEVASTATINGENTERICDISEASEWITHACUTEDIARRHEA，DEHYDRATIONANDSIGNIFICANTMORTALITYINSWINE．THEREBY,ITISONEOFTHEMOSTIMPORTANTDISEASECAUSINGHEAVYECONOMICLOSSESINCHINA．IN2010，ANOUTBREAKOFPEDOCCURREDINCHINAANDCAUSEDSIGNIFICANTHIGHMORALITYINPIGLETS．TOINVESTIGATETHEMOLECULAREPIDEMIOBGICALFEATURESANDDYNAMICTRENDSOFPEDVANDCOMMITTEDTOBETTERPREVENTIONANDCONTROIOFTHEDISEASE，WECONDUCTEDTHISSTUDYMAINLYINCLUDINGTHREEPARTSASDESCRIBEDBELOW．1．EPIDEMIOLOGYOFPEDINCHINA314SPECIMENSAMPLESWERECOLLECTEDIN5PROVINCESOFCHINADURING2012TO2015ANDWEREDETECTEDBYREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCRTOINVESTIGATETHEEPIDEMIOBGYOFPED．THERESUKSSHOWEDTHEPOSITIVERATEREACHEDTO24．2％76／314．PEDPOSITIVERATEOFGUANGDONG、SHANGHAI、JIANGSU、HENANANDJILINWERE94．7％、27．6％、17．8％、31．6％AND0％RESPECTIVELY．SOMEREPRESENTATIVESAMPLESWERESELECTED，ANDS，M，ORF3GENEOFWHICHWEREAMPLIFTED，CBNEDANDSEQUENEED．NUCLEOTIDESEQUENCEALIGNMENTREVEALEDTHATCHINESEEPIDEMICSTRAINSSHAREDTHEHIGHESTIDENTITYWITHSOUTHKOREANANDAMERICANEPIDEMICSTRAINS，BUTLOWESTIDENTITYWITHEUROPEANSTRAINSANDCV777．AMINOACIDSEQUENCEANALYSISBASEDONSTRUCTURALPROTEINSSHOWEDASIGNIFICANTDIVERSITYINS1PROTEIN．AMINOACIDSEQUENCEOFMANDORF3WEREHIGHLYCONSERVED．ORF3GENEWASTHEONLYACCESSORYGENEOFPEDV,ANDTHENUCLEOTIDESEQUENCEALIGNMENTSHOWEDADELETIONABOUT49BPINORF3OFHN13ANDYM．2．PREPARATIONOFMONOCLONALANTIBODIESAGAINSTPEDVBALB／CMICEWEREIMMUNIZEDWITHULTRACENTRIFUGATIONPURIFIEDVIRIONS．AFTERBOOSTIMMUNIZATIONTHESPLEENCELLSOFIMMUNIZEDMICEWEREFUSEDWITHSP2／0MYEBMACELLS．DETCTIONBYIFA，NINEHYBRIDOMACELLSWHICHCANSECRETEMONOCLONALANTIBODIESAGAINSTPEDVWEREGENERATED．THESEHYBRIDOMACELLSWERENAMEDASPEDV1C12，PEDV2A9，PEDV2C11、PEDV二2E5、PEDV2FL、PEDV3E9、PEDV二5812、PEDV6D1、PEDV6E10．THEIMMUNOGLOBULINSUBTYPESOFMONOCLONALANTBODIESWEREIDENTIFIEDWITHACOMMERCIAL

簡介：貴州大學2016屆碩士研究生學位論文屆碩士研究生學位論文豬病毒性腹瀉豬病毒性腹瀉PCR檢測方法建立與流行病學調查檢測方法建立與流行病學調查學科專業(yè)學科專業(yè)預防獸醫(yī)學預防獸醫(yī)學研究方向研究方向獸醫(yī)獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共衛(wèi)生學導師師王開功王開功教授指導小組文明教授周碧君教授程振濤副教授溫貴蘭副教授鮮思美副教授研究生生馮旭芳馮旭芳中國﹒貴州﹒貴陽2016年6月分類號S8513論文編號2013022064密級公開課題來源課題來源1貴州省生豬質量安全工程技術研究中心建設項目“生豬健康養(yǎng)殖實驗室建設與技術研發(fā)”黔科合農C字20114022號；2貴州省科學技術廳農業(yè)攻關項目“貴州省仔豬腹瀉性疫病風險分析及綜合防控技術研究”黔科合NY201530091號；3貴州省農業(yè)委員會科技計劃項“貴州省2015年重大動物疫病省級定點監(jiān)測”201501號。資助完成資助完成

簡介：揚州大學碩士學位論文MASTERTHESISBIOLOGICALANDPHYLOGENETICCHARACTERIZATIONOFDIRRERENTSUBGENOTYPENEWCASTLEDISEASEVIRUSESBELONGINGTOGENOTYPEⅥBYMASTERCANDIDATEJIAJIALIUADVISORPROFXIUFANLIUMAJORPREVENTIVEVETERINARYMEDICINEYANGZHOUUNIVERSITYJUNE，2016揚州大學碩士學位論文的核苷酸與氨基酸序列的同源性分別為925～100％和927～100％。同時，鴿源和雞源Ⅵ型毒株均與60年代VIA亞型分離株的遺傳距離較近；一氨基酸序列同源性分別為952～984％和960～968％，表明80年代分離到的Ⅵ型毒株均由該亞型進化而來；而上世紀80年代之后分離的病毒與VIA亞型之間的遺傳距離越來越遠。因此，1980S分離到的基因Ⅵ型NDV均由VIA亞型進化而來，隨著時間的推移病毒在進化過程中出現(xiàn)了多個基因亞型。對40株基因Ⅵ型NDV的全基因序列進行遺傳進化分析結果與上述基本一致。根據(jù)全基因序列與各基因編碼區(qū)序列分別繪制的遺傳進化樹保持一致，說明基因Ⅵ型NDV的遺傳進化是在基因組水平上整體進行的。此外，為了進一步比較鴿源與雞源毒株在分子水平上的差異，我們對40株基因Ⅵ型NDV的核苷酸及各基因編碼的氨基酸置換情況進行了統(tǒng)計分析，與雞源基因Ⅵ型NDV相比，鴿源毒株前導序列的第32位核苷酸由A變?yōu)镚，且鴿源毒株在6個結構蛋白上均出現(xiàn)了特征性氨基酸位點的變化。關鍵詞新城疫病毒；基因Ⅵ型；雞；鴿；致病性；遺傳進化分析

簡介：分類號S8553單位代碼10364密級學號13720222安徽農業(yè)大學安徽農業(yè)大學學位論文野鳥源新城疫病毒的基因組分析及其生物學特性鑒定GENOMICANALYSISBIOLOGICALACTERIZATIONSOFNEWCASTLEDISEASEVIRUSESISOLATEDFROMWILDBIRDS研究生李小陽指導教師李郁教授合作指導老師朱啟運研究員申請學位門類級別農學碩士專業(yè)名稱預防獸醫(yī)學研究方向家畜傳染病學所在學院動物科技院答辯委員會主席2016年6月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時間年月日關于論文使用授權的說明本人完全了解安徽農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意安徽農業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議研究生簽名時間年月日第一導師簽名時間年月日

簡介：分類號S8553密級碩士學位論文華南地區(qū)豬場流感病毒血清學調查及重組H3N2亞型SIV候選疫苗株的初步研究何淑儀指導教指導教師張桂紅教授學院名學院名稱獸醫(yī)學院專業(yè)名專業(yè)名稱預防獸醫(yī)學答辯委員會主席答辯委員會主席黃淑堅教授中國廣州2016年6月I摘要豬是流感病毒重要的宿主之一，不僅能感染人流感病毒，而且能感染禽流感病毒，對當前的流感生態(tài)環(huán)境的形成起到重要的作用。甲型H1N12009流感病毒的爆發(fā)，說明豬能夠獨立地促進流感毒株的產生。豬流感（SWINEINFLUENZA，SI）由豬流感病毒（SWINEINFLUENZAVIRUS，SIV）引起，是一種急性和高度感染性呼吸系統(tǒng)性疾病，一般呈現(xiàn)地方流行性。典型的臨床癥狀表現(xiàn)為突發(fā)性咳嗽、高熱、嗜睡、厭食、鼻涕、呼吸困難和體重下降等，具有高發(fā)病率但低死亡率的特征。SI極易導致繼發(fā)感染或混合感染，以致進一步發(fā)展成豬呼吸道疾病綜合癥，造成一定的經濟損失。H1N1、H1N2和H3N2亞型豬流感病毒是目前主要的流行毒株。為了調查中國華南地區(qū)豬群豬流感病毒和甲型H1N12009流感病毒（H1N1PDM09）的流行情況，本研究于2013年10月至2014年9月期間，在中國華南地區(qū)的廣東省、江西省、湖南省、福建省和廣西壯族自治區(qū)共73個豬場，采集未進行流感疫苗免疫的臨床健康豬的血清樣品2208份。采用歐亞類禽豬流感H1N1、類人豬流感H3N2和甲型H1N1PDM09流感病毒，通過血凝抑制試驗（HI），對這2208份血清進行SIV和H1N1PDM09流感病毒血清學檢測。結果顯示流感病毒抗體為陽性的血清共1269份（5742）。SIV和H1N1PDM09流感病毒的流行存在明顯的區(qū)域性差異，其中廣東省和廣西壯族自治區(qū)的感染率最高（P001），分別為6448和7500。EAH1N1、H3N2SIV和H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率分別是2251、3297和2649。H1N1PDM09流感病毒的抗體幾何平均滴度（GEOMETRICMEANANTIBODYTITERS，GMT）最高（9193104，P005）。EAH1N1和H3N2SIV在冬季血清陽性率最高，然而在冬末（2月）陽性率卻最低（P001）。H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率在5月和9月出現(xiàn)高峰（P001）。母豬體內的EAH1N1和H1N1PDM09流感病毒抗體陽性率分別為2593和2804，均比仔豬（1963和2329）和育肥豬（2232和2716）高，但仔豬的H3N2SIV抗體陽性率卻比較高。本研究為華南地區(qū)豬場SIV和H1N1PDM09流感病毒的預防提供參考依據(jù)。普遍認為，疫苗是抵抗流感病毒感染最有效的方法。至今，油佐劑的全病毒滅活疫苗是應用最廣泛且技術最成熟的豬流感病毒疫苗。本研究利用反向遺傳技術，成功構建了H3N2亞型豬流感病毒L22的8質粒系統(tǒng)。將ASWINEGUANGDONGL222010（H3N2）豬流感病毒的HA、NA基因與APUERTORICO81934的6個內部基因片段重

簡介：分類號S48239密級博士學位論文廣東省豬群和執(zhí)業(yè)人群流感病毒血清學調查及新型PICV載體流感疫苗免疫保護效果評價陳濟鐺指導教指導教師張桂紅教授學院名學院名稱獸醫(yī)學院專業(yè)名專業(yè)名稱預防獸醫(yī)學答辯委員會主席答辯委員會主席陸承平教授中國廣州2016年6月I摘要A型流感病毒宿主范圍廣泛，如人、豬、禽、犬等。由于豬呼吸道上皮細胞的受體分布特性，豬可以被禽類和人類流感病毒感染，而豬流感病毒也可感染人。因此，豬被認為是人、豬、禽流感病毒的天然“混合器”，豬流感病毒的常規(guī)監(jiān)測具有重要的公共衛(wèi)生安全學意義。目前抵抗流感病毒侵襲的最好方法是進行疫苗免疫。但由于流感病毒基因組特征，病毒基因極不穩(wěn)定，進化頻繁。疫苗形式及免疫策略有限，這使有效預防流感病毒的傳染和傳播變得困難。為評估廣東地區(qū)豬群、執(zhí)業(yè)人群感染多種亞型流感病毒的風險，從2013年3月至2014年3月，分別從廣東省6個不同城市的生豬養(yǎng)殖場和活禽市場中分別采集豬群血清樣本，共6510份。其中，生豬養(yǎng)殖場樣本4910份，活禽市場樣本1600份。通過血凝抑制（HI）檢測血清中抗人類、豬和禽流感病毒抗體的水平，同時分析各采樣城市地理位置、生長階段（或活禽市場中存留時間）、季節(jié)等因素對血清陽性率影響。通過單因素分析法，計算各因素對豬群感染不同流感病毒風險的影響。結果顯示，影響豬群不同亞型流感病毒感染的主要因素為生長階段（或活禽市場內存留時間）和季節(jié)因素。在活禽市場中存留時間較長的豬只，感染禽流感的風險顯著高于養(yǎng)殖場的豬。廣東各地豬群在秋季感染流感病毒風險較其他季節(jié)高。此外與禽類有密切接觸是豬群感染禽流感（及類禽豬流感）的主要風險因素。由2013年12月起至2014年1月，在廣東省各地選取符合條件的豬場工人，禽場工人，活禽市場工作人員以及寵物醫(yī)院獸醫(yī)進行血清樣本采集，同時采集無長期動物接觸史的志愿者血清作為對照。利用HI試驗檢測志愿者血清中抗人類、豬、禽和犬流感病毒抗體的水平。運用單因素分析方法計算不同因素（如，年齡、性別、工作種類以及動物接觸情況等）對人類血清抗體陽性率的影響。通過分析發(fā)現(xiàn)豬場工人感染經典豬流感和歐亞類禽豬流感的風險顯著高于對照組。而禽場工人感染禽流感病毒AVH7和AVH9的風險則顯著高于非禽類接觸人群?；钋菔袌龉ぷ魅藛T感染AVH5、AVH7和AVH9的風險高于其他執(zhí)業(yè)人群?；钋菔袌龉ぷ魅藛T感染豬流感病毒的風險也高于對照組人群。該結果提示活禽市場工作人員同時面臨兩種不同宿主的流感病毒感染風險。PICHINDE病毒（PICV）屬于沙粒病毒科，沙粒病毒屬成員，是雙義編碼RNA病毒。在感染初期主要攻擊巨噬細胞和樹突狀細胞，并引起高水平的T細胞免疫反應。

簡介：學校代碼10564學號2013202843分類號S85265密級碩士學位論文表達犬瘟熱病毒H基因重組狂犬病病毒生物學特性的研究趙靜指導教指導教師郭霄峰教授學院名學院名稱獸醫(yī)學院專業(yè)名專業(yè)名稱預防獸醫(yī)學答辯委員會主席答辯委員會主席陳金頂教授中國廣州2016年6月摘要狂犬?。≧ABIES）是由狂犬病病毒（RABIESVIRUSRABV引起的一種人獸共患傳染病，在全球范圍內流行，是目前病死率最高的傳染病之一，一旦感染出現(xiàn)臨床癥狀，幾乎100的死亡。犬瘟熱（CANINEDISTEMPER，CD）是由犬瘟熱病毒（CANINEDISTEMPERVRUS，CDV）引起的高度接觸性傳染病，它在全球范圍內流行，死亡率高達80％，給養(yǎng)犬業(yè)和毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的危害。預防接種是控制狂犬病和犬瘟熱的主要途徑。目前，傳統(tǒng)的狂犬病弱毒疫苗成本低廉，但存在毒力殘留或致病性回復突變的安全隱患；進口疫苗安全性高，免疫效果好，但價格昂貴，難以廣泛推廣使用。研制安全、高效、成本低廉的動物狂犬病疫苗，仍具現(xiàn)實意義。市場上應用廣泛的犬瘟熱疫苗存在熱穩(wěn)定性差、免疫效果易受母源抗體干擾等多重問題。因此，研制安全、高效的新型CD疫苗具有重要意義。本研究利用已建立的狂犬病病毒（RABIESVIRUSRABV反向遺傳操作技術平臺，在通過反向遺傳拯救的狂犬病病毒弱毒株HEPDG的基礎上，運用分子生物學技術在狂犬病病毒（HEPDG株）基因組G與L之間再插入犬瘟熱病毒H基因，構建了重組全長CDNA質粒PHEPDG（H），成功拯救出同時表達狂犬病病毒雙G蛋白和犬瘟熱病毒H蛋白的重組狂犬病病毒HEPDG（H）。通過對重組病毒的生物學特性研究，該重組狂犬病毒HEPDG（H）可以在BHK細胞上穩(wěn)定的增殖，達到較高的病毒滴度。抽取該重組病毒第2、5、10代的RNA，進行RTPCR擴增H、DG基因并測序，基因未發(fā)生突變。熒光定量PCR和WESTERNBLOT驗證表明外源基因H和DG能夠表達。病毒的生長曲線表明HEPDG（H）保持著與HEPDG毒株相似的生長特性，在96H達到高峰，但重組病毒HEPDG（H）的滴度在每個時間點略低于HEPDG毒株。病毒的擴散感染實驗顯示在低MOI的情況下，重組病毒HEPDG（H）的擴散能力不及HEPDG毒株，這與生長曲線相吻合。致病性實驗顯示，重組病毒HEPDG（H）與HEPDG對67周齡成鼠沒有致死性，且重組病毒HEPDG（H）對成鼠體重的影響弱于HEPDG；而對3日齡內的乳鼠，結果顯示HEPDG（H）的致命性高于HEPDG。免疫原性實驗顯示，重組病毒HEPDG（H）與HEPDG均能誘導小鼠產生抗狂犬病的抗體，在7D時抗體已達到保護水平（05EU），且HEPDG（H）可誘導產生CDV中和抗體。攻毒試驗顯示HEPDG（H）與HEPDG免疫3周后，誘導的RABV抗體水平能夠抵御CVS24的攻擊，這些結果表明，重組的狂犬病病毒可以作為有潛力的疫苗候選株。