β片層阻斷肽H102對AD轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的影響.pdf

1、目的：
　　通過研究β片層阻斷肽H102對APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠腦內(nèi)NF-κB通路相關(guān)蛋白和iNOS、cleaved caspase-3及BACE1蛋白活性及表達(dá)的影響，探究NF-κB通路在AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠腦內(nèi)的變化及β片層阻斷肽H102是否可能通過對 NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的影響來發(fā)揮對阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s Disease, AD）的治療作用。
　　方法：
　　選用8周齡APP/PS

2、1雙轉(zhuǎn)基因雄性AD模型小鼠30只，隨機(jī)分為模型組和給藥組，每組15只；另選同周齡同背景的C57BL/6J雄性小鼠15只設(shè)為對照組。給藥組小鼠每日經(jīng)鼻腔給予H102溶液（5.8 mg/kg）5μl，對照組和模型組小鼠每日給予等量空白輔料溶液。給藥16周后，采用 Morris水迷宮檢測小鼠的空間參考記憶的變化，主要包括定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分。
　　行為學(xué)檢測后，麻醉、灌注、冰上取腦，一側(cè)的腦組織分離皮層和海馬后于-80℃凍

3、存。將另一側(cè)腦組織放入4％多聚甲醛溶液內(nèi)固定，之后進(jìn)行蠟塊包埋切片。采用免疫組織化學(xué)方法和免疫印跡技術(shù)測定小鼠腦組織內(nèi) Aβ1-42、p-IKK、IKK、p-NF-κB、NF-κB、p-IκB、IκB、iNOS、cleaved caspase-3和BACE1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）Morris水迷宮測試
　　定位航行實(shí)驗(yàn)：模型組逃避潛伏期均長于對照組，第2天起給藥組小鼠的逃避潛伏期較模型組顯著縮短（均P＜0

4、.05），給藥組除第1天和第4天外，與對照組小鼠的逃避潛伏期無顯著性差異（P>0.05）。
　　空間探索實(shí)驗(yàn)：以目標(biāo)象限停留時(shí)間、跨越隱形平臺次數(shù)和中心活動時(shí)間作為分析小鼠記憶能力的指標(biāo)。與對照組小鼠相比，模型組跨越隱形平臺次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間以及中心活動時(shí)間顯著低于對照組（均P＜0.05），給藥組小鼠跨越隱形平臺次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間以及中心活動時(shí)間顯著高于模型組（均P＜0.05）。
　　模型組小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力較對

5、照組顯著降低，給藥組較模型組顯著提高（均P<0.05）。
　?。?）免疫組化及免疫印跡檢測
　　免疫組化染色結(jié)果：與對照組相比，模型組小鼠腦內(nèi) Aβ1-42的染色較深，蛋白表達(dá)顯著高于對照組（P<0.05）；與模型組相比，給藥組小鼠腦內(nèi)Aβ1-42的染色較淺，蛋白表達(dá)顯著低于模型組（P<0.05）。p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白存在于細(xì)胞胞漿和胞核，對照組胞內(nèi)著色較淺，p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白累

6、積光密度值較低；模型組胞內(nèi)著色深，蛋白表達(dá)高于對照組，給藥組胞內(nèi)著色較淺，蛋白表達(dá)較模型組顯著降低（均P＜0.05）。NF-κB蛋白存在于細(xì)胞胞核和胞漿內(nèi)，在海馬區(qū)對照組胞內(nèi)著色較淺，NF-κB蛋白累積光密度值較低，模型組胞內(nèi)著色深，蛋白表達(dá)高于對照組，給藥組胞內(nèi)著色較淺，蛋白表達(dá)較模型組顯著降低（均 P＜0.05）；在皮層區(qū)三組染色差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。iNOS和cleaved caspase-3主要存在于胞漿，對照組胞漿

7、著色較淺， iNOS和cleaved caspase-3蛋白累積光密度值較低；模型組胞漿著色深，蛋白表達(dá)高于對照組，給藥組胞漿著色較淺，蛋白表達(dá)較模型組顯著降低（均P＜0.05）。BACE1主要存在于胞膜，對照組胞膜著色較淺BACE1蛋白累積光密度較低；模型組胞膜著色深，蛋白表達(dá)高于對照組，給藥組胞膜著色較淺，蛋白表達(dá)較模型組顯著降低（均P＜0.05）。
　　免疫印跡結(jié)果：與對照組相比，模型組小鼠腦內(nèi)p-IKK、p-NF-κB、p

8、-IκB、iNOS、cleaved caspase-3、BACE1和核內(nèi) NF-κB蛋白表達(dá)均高于對照組(P＜0.01），給藥組顯著低于模型組(P＜0.05)。IKK總蛋白在三組小鼠腦內(nèi)表達(dá)無顯著性差異(P>0.05);與對照組相比，模型組小鼠腦內(nèi) IκB蛋白表達(dá)低于對照組(P＜0.05），給藥組高于模型組(P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　在APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠腦內(nèi)NF-κB信號通路被過度激活；β片層阻斷肽H