HSP90抑制劑Geldanamycin改善卵巢癌耐藥細胞對Taxol敏感性研究.pdf

1、熱休克蛋白90(HSP90)在生物進化過程中高度保守，作為經(jīng)典的分子伴侶，對許多參與細胞內正常生理活動信號蛋白的結構和功能都有調控作用。大多數(shù)腫瘤細胞內HSP90蛋白表達水平升高，因此，抑制HSP90的功能，使其不能與客戶蛋白正常結合從而降解其底物，阻斷細胞信號傳導，可以抑制腫瘤細胞的生長。紫杉醇類藥物是卵巢癌臨床化療的一線藥物，化療耐藥嚴重影響卵巢癌病人預后。
　　目的:
　　本研究旨在探索HSP90抑制劑Geldanam

2、ycin(GA)單獨使用時以及與Taxol聯(lián)用時對卵巢癌細胞增殖和凋亡的影響，通過進一步探索兩藥聯(lián)用在卵巢癌耐Taxol細胞株中的協(xié)同作用機制，為改善卵巢癌紫杉醇化療耐藥提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1、CCK8實驗、平板克隆形成實驗檢測單獨使用GA以及與Taxol聯(lián)用對腫瘤細胞增殖的影響。2、流式細胞術檢測單獨使用GA以及與Taxol聯(lián)用對細胞周期和凋亡的影響。3、Western blotting方法探索GA與Taxol

3、聯(lián)用效應的相關分子機制。
　　結果:
　　1、隨著Taxol濃度的增加，卵巢癌細胞A2780和A2780/T細胞的增殖抑制效應不斷增強。當藥物濃度增加到200 nM及以上時，Taxol在兩株細胞中引起的增殖抑制效應不再隨著濃度增加而增強。當Taxol濃度為10nM和20nM時，與A2780/T細胞相比，A2780細胞增殖抑制作用更明顯。2、隨著GA濃度的增加，卵巢癌細胞A2780和A2780/T細胞的增殖抑制效應逐漸增強，且

4、A2780/T較A2780更敏感。當GA濃度為10nM時，兩株細胞的增殖抑制效應尚不明顯，當藥物濃度為100nM時，兩株細胞的增殖抑制效應均明顯增強。當藥物濃度增加到500 nM及以上時，GA在兩株細胞中引起的增殖抑制效應不再隨著濃度增加而增強。3、100nM GA與Taxol聯(lián)用時，在細胞內引起凋亡效應較單獨使用GA或者Taxol增強，在一定濃度范圍內，隨著Taxol濃度的增加，聯(lián)用后產(chǎn)生的細胞毒性作用呈協(xié)同增強效應，經(jīng)統(tǒng)計學分析，聯(lián)

5、用組和單獨使用GA或者Taxol組之間有顯著性差異。4、Western blot結果顯示，GA與Taxol聯(lián)用時，A2780/T細胞內剪切型PARP及Caspase3表達顯著性增強，H3P、pho-P38和pho-H2AX表達明顯增加，而pho-CDK1(pho-Y15)表達明顯下降。
　　結論:
　　HSP90小分子抑制劑GA可以有效抑制卵巢癌細胞的增殖，低劑量GA(100 nM)可顯著增強紫杉醇在卵巢癌耐藥細胞株A278