天然鈣網蛋白和重組鈣網蛋白免疫生物學活性的比較研究.pdf

1、鈣網蛋白（Calreticulin，CRT）是一種內質網蛋白，由Thomas J.Ostwald等1974年首次從兔的基質網中分離出來。CRT是一個酸性的Ca2+結合蛋白，分子量約為46kD，分為N、P、C三個結構域。N和P連接部位為該蛋白發(fā)揮分子伴侶功能的重要區(qū)域，C端是一個酸性結構區(qū)域，結合有大量的Ca2+，被譽為細胞內的“鈣庫”。近年來的研究表明，CRT還存在于內質網以外并發(fā)揮著重要的生物學功能，諸如參與適應性免疫的抗原加工和遞呈

2、、抗腫瘤免疫應答、介導凋亡細胞的吞噬、細胞的粘附和遷移以及免疫細胞的增殖和活化等。
　　 為了進一步研究CRT的免疫生物學活性，我們以新鮮鼠肝作為原材料，利用硫酸銨沉淀和DEAE陰離子交換層析等方法從收集的鼠肝細胞中純化得到天然鈣網蛋白（Native calreticulin，N-CRT）。同時，我們還利用大腸桿菌系統表達了重組鈣網蛋白(Recombinant calreticulin，rCRT)，并用Ni+柱對其進行純化，得到

3、了較高純度的蛋白。因為rCRT存在較大量多聚體的情況，我們利用凝膠過濾的方法對其進行了分離，得到了rCRT多聚體(PrCRT)，rCRT單體Ⅰ(MrCRTⅠ)，rCRT單體Ⅱ(MrCRTⅡ)等三個組分。在此基礎上，我們對上述幾種成分刺激腹腔巨噬細胞(PMC)的活性進行了研究，發(fā)現rCRT和PrCRT具有很強的刺激細胞產生NO、TNF-α和IL-6的活性，而N-CRT、MrCRTⅠ和MrCRTⅡ的活性則相對較弱。鑒于多聚體強烈的功能可能受

4、到原核表達系統中內毒素的污染，我們利用N-CRT研究了其與LPS可能存在的協同刺激活性。結果表明，N-CRT不能和LPS結合，也不具有協同增強LPS活性的功能。
　　 我們還利用N-CRT，rCRT，PrCRT，MrCRTⅠ，MrCRTⅡ分別免疫了C57BL/6小鼠，分析其刺激小鼠產生抗體的情況。結果表明，N-CRT，MrCRTⅠ，MrCRTⅡ均不能免疫小鼠產生特異性的抗體，而rCRT和PrCRT均能產生高滴度的特異性抗體。