2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  通過觀察臘氧素A4(Lipoxin A4)對腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosisfactorα,TNF-α)誘導的TNFR2(Tumor necrosis factorα ReceptorⅡ)沉默的人肺微血管內(nèi)皮細胞(Human pulmonary microvascular endotheliacells,HPMECs)凋亡相關(guān)的死亡受體通路的影響,并對其可能的分子機制進行初步的探討。并且檢測LXA4對炎癥

2、通路相關(guān)的幾種常見指標的影響。
  方法:
  根據(jù)RNA干擾技術(shù)合成干擾TNFR2 mRNA合成的慢病毒,運用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法沉默人肺微血管細胞的TNFR2(P75,CD120b),使之不表達。實驗全程所用的細胞均為TNFR2沉默的HPMECs。使TNF-α僅作用于TNFR1(P55,CD120a),表現(xiàn)為TNFR1相關(guān)的炎癥和凋亡作用。實驗分為三組:對照組(control)、TNF-α刺激組(TNF-α50ng/mL)、

3、LXA4治療組(LXA4100ng/mL預處理1h,TNF-α50ng/mL),必要時增加第四組LXA4單獨作用組(LXA4100ng/mL)。熒光顯微鏡和流式細胞儀分別觀察和檢測轉(zhuǎn)染后HPMECs的熒光強度和轉(zhuǎn)染效率,熒光定量PCR和western blot檢測TNFR2的干擾效率。蛋白質(zhì)印記(Western blot)檢測TNFR1下游死亡受體通路上的關(guān)鍵分子TNF受體相關(guān)的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(TRADD)和Fas相關(guān)的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白(

4、FADD)的表達水平。蛋白質(zhì)印記(Western blot)檢測細胞凋亡過程中的關(guān)鍵Caspase蛋白(富含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶)Caspase-8、cleaved Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-3的蛋白水平。用Caspase-8、Caspase-3活性檢測試劑盒分別檢測各組Caspase-8、Caspase-3酶的活性。實時熒光定量PCR檢測TNFR2(-/-)HPMECs白介素6(Int

5、erleukin-6,IL-6)、白介素8(Interleukin-8,IL-8) mRNA的表達水平。實時熒光定量PCR檢測TNFR2(-/-)HPMECs常見炎癥指標細胞間粘附分子Ⅰ(ICAM-1,Intercellular cell adhesion molecule-1,CD54)、血管細胞粘附分子Ⅰ(VCAM-1,Vascular cell adhesion molecule-1),E選擇素(Endothelialleukoc

6、yte adhesion molecule-1, CD62E)的mRNA的表達水平。
  結(jié)果:
  (1)在2h點,LXA4抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-)HPMECs死亡受體通路的TRADD、FADD蛋白表達的增高;
  (2)在4h點LXA4抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-)HPMECs cleaved Caspase-8的增高;而對全長的Casepase-8沒有影響;
  (3)在9h點,L

7、XA4抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-)HPMECs cleaved Caspase-3的增高;而對全長的Casepase-3沒有影響;
  (4)在24h點,LXA4抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-) HPMECs Caspase-8、Caspase-3酶活性的增高;
  (5)在24h點,TNF-α使TNFR2(-/-)HPMECs抗凋亡蛋白Bcl-2反應性增高,LXA4可以使TNFR2(-/-)HPMECs

8、抗凋亡蛋白Bcl-2上調(diào)地更高;
  (6)在4h點,LXA4可以抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-)HPMECs IL-6、IL-8mRNA表達的上調(diào);(7)在6h點,LXA4可抑制TNF-α誘導的TNFR2(-/-)HPMECs ICAM-1、ECAM-1、E-selectin mRNA表達量的增高。
  結(jié)論:
  LXA4對由TNF-α誘導的人肺微血管內(nèi)皮細胞的凋亡具有抑制作用,可能通過下調(diào)TNFR1(P5

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