腫瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性CTL表位的預(yù)測(cè)及鑒定.pdf

1、全文分為以下三個(gè)部分:第一部分:表位預(yù)測(cè)目的 預(yù)測(cè)MAGE-n抗原的一般生物學(xué)特性及HLA-A2限制性CTL表位.方法 用SYFPEITHI超基序法遠(yuǎn)程預(yù)測(cè)系統(tǒng)和量化基序多項(xiàng)式法結(jié)合的預(yù)測(cè)方法,篩選新的MAGE-n抗原HLA-A2限制性CTL表位作為侯選表位.應(yīng)用ANTHEPROTV5.0軟件預(yù)測(cè)MAGE-n編碼蛋白的一般生物學(xué)特性.結(jié)論SYFPEITHI超基序法和量化基序多項(xiàng)式法結(jié)合的預(yù)測(cè)方法可提高表位預(yù)測(cè)的效率及準(zhǔn)確性.第二部分:預(yù)

2、測(cè)表位的免疫學(xué)特性，目的用表位重建技術(shù)、ELISPOT及特異性殺傷實(shí)驗(yàn)研究HLA-A2限制性CTL候選表位的結(jié)合力及免疫活性.方法 對(duì)預(yù)測(cè)的抗原表位進(jìn)行固相合成,并用HPLC進(jìn)行純化,質(zhì)譜法(MS)鑒定.侯選表位與HLA-A2位點(diǎn)的親和力及結(jié)合穩(wěn)定性用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)、T2結(jié)合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)及MHC-肽復(fù)合體穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)測(cè)定.RT-PCR法檢測(cè)HCC細(xì)胞系MAGE-n表達(dá).脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法構(gòu)建MAGE-n基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞系.應(yīng)用ELISPOT技術(shù)檢測(cè)

3、抗原肽特異性釋放IFN-γ的T細(xì)胞頻數(shù).從HLA-A2陽(yáng)性健康志愿者外周血分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),用T2細(xì)胞負(fù)載MAGE-n抗原肽反復(fù)刺激活化(每周1次,共4次)誘導(dǎo)抗原肽特異性CTL.乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測(cè)定誘導(dǎo)CTL對(duì)表達(dá)MAGE-n的HLA-A2陽(yáng)性HCC細(xì)胞的識(shí)別及殺傷效應(yīng).結(jié)論 該研究證實(shí)表位重建技術(shù)結(jié)合免疫學(xué)方法(ELISPOT,LDH細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn))可提高表位研究的效率和準(zhǔn)確性.實(shí)驗(yàn)篩選出的MAGE-n抗原表位QLV

4、FGIEVV可作為特異性免疫治療的靶分子而應(yīng)用于HLA-A2陽(yáng)性肝癌患者免疫治療.第三部分:荷人肝癌SCID小鼠抑瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)康难芯縈AGE-n抗原表位QLVFGIEVV特異性CTL對(duì)荷人肝癌SCID小鼠的抑瘤作用.方法 用HHCC(HLA-A2<'+>,MAGEn<'+>細(xì)胞皮下接種建立SCID小鼠荷瘤模型.用T2細(xì)胞負(fù)載抗原肽QLVFGIEVV反復(fù)刺激活化從HLA-A2陽(yáng)性健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)誘導(dǎo)抗原肽特異性CTL.動(dòng)