IBDV超強毒株GX8-99株VP3基因及其A節(jié)段3’端非編碼區(qū)基因與致病性的關系.pdf

1、傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的急性接觸性傳染病，是危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要傳染病之一。IBDV主要侵害雛雞的中樞免疫器官(法氏囊)，導致免疫抑制。1957年本病首次在美國的特拉華州的甘布羅鎮(zhèn)(Gumboro)的肉雞群中發(fā)生，20世紀80年代美國又發(fā)現(xiàn)了變異株，歐洲國家首先報道有超強毒株(vvIBDV)出現(xiàn)，90年代初vvlBDV傳至中國及亞洲其它國家和地區(qū)。IBD給養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。為探討。vvI

2、BDV基因變異與致病性之間的關系，本研究以vvIBDVGX8/99株為研究對象，將vvlBDV GX8/99株進行傳代，研究從原始毒(雞源毒)→雞胚毒→細胞適應毒→細胞克隆化毒→回傳SPFX鳥傳代毒(雞源毒)→個輪回各代次毒VP3、A節(jié)段3’非編碼區(qū)核苷酸及氨基酸與致病性之間的關系，這將為進一步構建含有人工突變的特定基因片段或基因位點的IBDV傳染性克隆，從而反證與IBDV毒力基因相關的位點提供依據(jù)。 本研究共分2部分：

3、 一、GX8/99株原始毒及傳代毒VP3基因與致病性的關系： 為了研究超強毒雞傳染性法氏囊病病毒(vvIBDV)的致病性與其VP3基因變化的關系，將vvIBDV GX8/99株囊毒在SPF雞胚連傳10代后，再在雞胚成纖維細胞(CEF)上連續(xù)盲傳至23代時開始引發(fā)CEF細胞病變，隨之用無限稀釋法連續(xù)克隆2次后獲得病毒克隆，再將該克隆化病毒分別連續(xù)回傳3～5周齡SPF雞20代。分別比較細胞毒及其克隆化毒回傳SPF雞后不同傳代毒中VP

4、3氨基酸分子的變化。結果表明：相對于原始囊毒，細胞毒(C25)在測序的VP3區(qū)域中有4個位點發(fā)生突變，并且變得與疫苗毒D78完全一致。而在回雞的過程中，4個突變位點中的大多數(shù)氨基酸不再發(fā)生變化，而第228位氨基酸在細胞致弱過程中由P突變?yōu)榧毎m應毒的L后，在回雞過程中又變回P(B15)。這初步揭示了VP3中的氨基酸變異與病毒的致病性有一定關系，而且也可能與細胞培養(yǎng)過程中及SPF雞傳代過程中組織的親和性有一定的關系。 二、 Gx8

5、/99株原始毒及傳代毒A節(jié)段3，端非編碼區(qū)基因與致病性的關系： 為了研究超強毒雞傳染性法氏囊病病毒(vvIBDV)的致病性與其A節(jié)段3’端非編碼區(qū)基因變化的關系，本試驗對vvIBDV GX8/99株各代次毒中A節(jié)段3’端非編碼區(qū)氨基酸序列進行了比較，結果表明：與超強毒HK46、D6948和GX株相比， GX8/99株的第20位氨基酸L為特有的，而與Cu-1M、P2、CEF94等弱毒株一致，且該位點在整個傳代過程中比較穩(wěn)定、沒有突