凍融抗原負載的DC-CIK細胞對SKOV3的殺傷作用.pdf

1、目的：探討負載人卵巢癌細胞株SKOV3凍融抗原(Ag)的樹突狀細胞(DC)與細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(CIK)共培養(yǎng)后，對DC及CIK細胞增殖的影響；探討與負載人卵巢癌細胞株SKOV3或COC1凍融Ag的DC共培養(yǎng)的CIK細胞對SKOV3殺傷作用的影響。
　　 方法：選擇12例上皮性卵巢癌患者，分離其外周血，獲得單個核細胞(PBMC)，用相應(yīng)的誘導(dǎo)因子體外誘導(dǎo)出DC與CIK細胞。
　　 分別收集處于對數(shù)生長期的SKOV3及

2、COC1細胞，用細胞凍融法提取Ag，并于DC培養(yǎng)的第5天將Ag加入DC中培養(yǎng)，使之成為負載Ag的DC。將經(jīng)Ag負載的DC與未經(jīng)Ag負載的DC分別和CIK細胞共培養(yǎng)后分組：實驗組：將經(jīng)Ag負載的DC與CIK細胞共培養(yǎng)作為實驗組(SKOV3Ag-DC+CIK組、COC1 Ag-DC+CIK組)。對照組：(1)將未經(jīng)Ag負載的DC與CIK共培養(yǎng)作為對照組1(DC+CIK組)；(2) CIK細胞單獨培養(yǎng)作為對照組2（CIK組）；(3) DC單獨

3、培養(yǎng)作為對照組3(DC組)；(4)負載抗原的DC為對照組4（Ag-DC組）。
　　 自培養(yǎng)第1天到第20天，用臺盼蘭拒染法動態(tài)監(jiān)測CIK細胞的增殖情況，觀察DC及Ag負載的DC對CIK細胞增殖的影響。
　　 用流式細胞技術(shù)分析DC組、SKOV3Ag-DC組、SKOV3Ag-DC-CIK組中DC細胞的表型，觀察負載Ag及CIK對其增殖的影響。分析CIK組、DC-CIK組、SKOV3Ag-DC-CIK組中CIK細胞表型，觀察

4、DC及Ag-DC對CIK細胞增殖的影響。
　　 用乳酸脫氫酶釋放法檢測CIK組、DC-CIK組、Ag-DC-CIK組（包括SKOV3-DC-CIK及COC1-DC-CIK組）對SKOV3的殺傷活性，對比觀察DC、SKOV3Ag-DC及COC1Ag-DC對CIK細胞殺傷活性的影響。
　　 結(jié)果：與DC共培養(yǎng)后的CIK細胞的增殖速率大于單CIK細胞，但與同負載抗原的DC共培養(yǎng)的CIK細胞增殖率相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0。

5、05)；
　　 Ag-DC-CIK組中DC細胞成熟表型高于DC組及Ag-DC組(P＜0.01)；
　　 Ag-DC-CIK組中CIK細胞成熟表型高于CIK組及DC-CIK組(P＜0.01)；
　　 SKOV3-DC-CIK組對SKOV3殺傷率高于CIK組、DC-CIK組及COC1-DC-CIK組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：(1)DC及負載SKOV3凍融Ag的DC與CIK共培養(yǎng)可促進DC、CIK細胞的成