SARI和PC4在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究.pdf

1、目的:
　　宮頸癌作為高發(fā)的惡性腫瘤嚴重危害著女性的生殖健康，目前宮頸癌的發(fā)病率在全球女性惡性腫瘤中位居第四，在發(fā)展中國家宮頸癌的死亡率居女性惡性腫瘤死亡率的首位。根據(jù)2015年NCCN發(fā)布的宮頸癌臨床指南中顯示宮頸癌的治療仍然以患者的手術切除為主，以放療、化療為輔助治療手段，對于不同病程的患者采取的主要治療策略也有所不同，所以在臨床治療中宮頸癌的早期診斷、治療策略的效果評估和預后的追蹤檢測顯得尤為重要。與其他腫瘤相比，宮頸癌存在

2、一段較長時間的癌前病變過程，且在此期間無明顯的臨床癥狀，現(xiàn)階段病理診斷及腫瘤分子標志物的應用對患者進行預后評估的準確性相對較差，因此明確宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移的分子生物學基礎對探索有效的腫瘤標記物有重要價值。
　　SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)又稱BATF2(basic leucinezippertranscription factor，ATF-like2)。正常

3、表達于人體多種組織中，在腫瘤發(fā)生過程中可以作為抑癌基因發(fā)揮抑制腫瘤生長的功能。SARI在乳腺、前列腺上皮細胞等正常組織中表達明顯高于其腫瘤組織，其表達水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有明顯的相關性，也有研究發(fā)現(xiàn)SARI低表達可以促進腫瘤的轉移和侵襲過程。以上研究均表明在細胞發(fā)生惡性轉化、增殖的過程中SARI表達水平下調，提示SARI可能抑制腫瘤細胞的發(fā)生和發(fā)展。
　　PC4(positive coactivator4)是存在于細胞核內的一種

4、輔助轉錄因子，可以參與細胞內DNA轉錄、修復等多種表達調控過程。有研究發(fā)現(xiàn)PC4在多種腫瘤組織中（如食管癌、乳腺癌及肺癌等）表達顯著升高，并發(fā)現(xiàn)PC4的高表達與腫瘤的轉移、放療抵抗等密切相關。以上研究均表明在細胞發(fā)生惡性轉化、增殖過程中PC4表達水平上調，提示PC4可能促進了腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移。
　　無論是抑癌基因SARI或是促癌基因PC4，在多種正常組織與腫瘤組織中的表達量均存在顯著差異，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關。

5、然而在宮頸癌中SARI或PC4的生物學功能及相關分子機制尚未見報道。故本研究以宮頸癌細胞為研究對象，以探究SARI和PC4對宮頸癌細胞生長的影響為主要目的，并通過闡明其表達調控的部分機制，為進一步探究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移的分子生物學基礎提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分 SARI在宮頸癌細胞生長中的作用和機制研究
　　首先通過Real-time PCR檢測SARI在宮頸癌臨床樣本中的表達特點;然后在He

6、La和CaSki細胞轉染SARI的表達質粒上調SARI的表達水平;使用Real-time PCR和Western blot檢測轉染SARI的表達質粒后SARI表達水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細胞SARI表達上調后對細胞生長的影響;流式細胞術分析上調SARI后細胞的周期和凋亡;報告基因檢測轉錄因子AP-1的轉錄活性;Western blot檢測抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2的表達。
　　第二部分 PC4在宮頸癌細胞生長中的作

7、用和機制研究
　　首先通過Real-time PCR檢測PC4在宮頸癌臨床樣本和宮頸癌細胞系中的表達特點;然后采用RNA干擾技術下調HeLa和CaSki細胞中PC4表達;使用Real-time PCR和Western blot檢測上述宮頸癌細胞中沉默PC4后PC4表達水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細胞PC4表達水平的改變對細胞生長的影響;流式細胞技術分析沉默PC4后的細胞周期;Western blot檢測在沉默PC4后宮頸癌細

8、胞中PARP及抗凋亡相關分子的表達水平的變化;通過Real-time PCR、Western blot等實驗探索相關分子信號通路對PC4表達的調控。
　　結果:
　　1.SARI在宮頸癌組織中低表達。SARI表達水平上調后，細胞生長活性受到抑制，凋亡細胞增加但對細胞周期沒有明顯影響。上調SARI的表達對AP-1的轉錄活性產(chǎn)生抑制，下調了抗凋亡分子Mcl-1的表達水平，但對Bcl-2的表達水平?jīng)]有產(chǎn)生顯著的影響。
　　2

9、.PC4在宮頸癌組織中高表達。PC4表達水平下調后，宮頸癌細胞的生長受到抑制，細胞周期發(fā)生阻滯且細胞發(fā)生凋亡，檢測相關分子發(fā)現(xiàn)PARP發(fā)生剪切，抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2表達均下調。PC4在宮頸癌細胞中的表達水平與E6癌蛋白的表達相關;E6原癌蛋白可以下調p53的表達并上調PC4的表達;抑癌因子p53可以抑制PC4的表達。
　　結論:
　　1.上調SARI使宮頸癌細胞的生長活性受到抑制，細胞發(fā)生凋亡。且在宮頸癌中SAR