基于凝集素芯片的釀酒酵母糖基化相關(guān)新基因全局性發(fā)現(xiàn)研究.pdf

1、蛋白質(zhì)糖基化是一種重要的翻譯后修飾,約有一半以上的蛋白質(zhì)是發(fā)生糖基化的,在許多生物過程中蛋白質(zhì)糖基化起著重要的作用。糖基化的形成由細胞內(nèi)的糖基轉(zhuǎn)移酶和其他轉(zhuǎn)運蛋白共同負責(zé),這些轉(zhuǎn)運蛋白或酶的變化(敲除或高表達)會對細胞表面的整體糖基化產(chǎn)生影響。目前在不同物種中已發(fā)現(xiàn)了眾多數(shù)量與細胞表面糖基化相關(guān)的基因,尤其是在一些模式生物中,如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。但這些相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)都是通過長期零散的研究所得到

2、的,由于缺乏相應(yīng)的技術(shù)手段,迄今為止仍難于進行全局性基因的發(fā)現(xiàn)研究,因此在模式生物如釀酒酵母中還可能有相當數(shù)量的糖基化相關(guān)基因有待發(fā)現(xiàn)。
　　本研究通過對兩套酵母庫中153個與糖基化相關(guān)的克隆進行芯片分析,建立了一套基于凝集素芯片酵母表面糖譜分析技術(shù)。結(jié)果證明表明我們所設(shè)計的實驗方案可行,并通過菌落 PCR及質(zhì)譜進一步確認芯片結(jié)果的可靠性。基于初篩結(jié)果,對BY4742庫中5263個單基因敲除菌株進行了篩選,后期數(shù)據(jù)分析仍在進行中。

3、通過對整體芯片結(jié)合信號弱的菌株重新進行芯片驗證,初步結(jié)果顯示 VAN和YLR358C兩敲除菌在NPL、VGA、ASA這三個凝集素的信號比野生菌株 BY4742低很多,而 VAN是編碼一已知的糖聚合酶亞基, YLR358C功能未知,很可能為備選糖基化相關(guān)的新基因。同時,通過構(gòu)建兩個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的糖基轉(zhuǎn)移酶基因ALG5和ALG8的雙敲除菌株進行芯片實驗,發(fā)現(xiàn)了4個雙敲除致死基因:YFL032W, PER1,NOP12,HAC1。這4個很可能是與