2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩79頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目標(biāo):
   經(jīng)典的觀點(diǎn)認(rèn)為縮宮素(oxytocin,OT)是下丘腦垂體分泌的九肽激素,其主要生理作用是促進(jìn)子宮平滑肌收縮并調(diào)節(jié)泌乳反射。近年來,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)OT具有調(diào)節(jié)消化道運(yùn)動(dòng)和分泌的功能,可能是一種新的胃腸神經(jīng)肽。我們最新的研究發(fā)現(xiàn)OT可通過腸神經(jīng)叢抑制大鼠十二指腸縱行肌的自發(fā)收縮,但其機(jī)制尚不清楚。肌間神經(jīng)元根據(jù)電生理特性可分為AH和S神經(jīng)元兩種類型,AH神經(jīng)元為內(nèi)在感覺神經(jīng)元(intrinsicprimaryaf

2、ferentneurons,IPANs),而S神經(jīng)元為中間和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)OT可使全部的AH神經(jīng)元(25/25)和部分S神經(jīng)元(10/30)膜電位發(fā)生超極化,因此我們推測(cè)OT抑制十二指腸的運(yùn)動(dòng)可能與其調(diào)節(jié)AH神經(jīng)元的活動(dòng)有關(guān)。本課題的主要目的是研究OT對(duì)AH神經(jīng)元電生理特性的影響及其機(jī)制。
   方法:
   將大鼠頸部脫臼處死,快速取出約1cm長(zhǎng)的一段十二指腸,沿腸系膜剖開,粘膜面向上展開固定在盛有柯

3、氏液的硅膠盤中。在解剖鏡下用顯微器械將粘膜、粘膜下層和環(huán)形肌依次剝離,剩余部分即為縱行肌-肌間神經(jīng)叢標(biāo)本(longitudinalmusclemyentericplexus,LMMP)。將LMMP標(biāo)本置于含10mg/ml木瓜蛋白酶的柯氏液中37℃消化50min,將組織剪碎后再置于含1mg/ml膠原酶Ⅱ的DMEM培養(yǎng)基中37℃消化55min,用玻璃吸管吹打約30次,1000r/min離心6min,棄去上清,用1ml含10%胎牛血清的DME

4、M將沉淀懸浮,37℃培養(yǎng),16h-24h后通過膜片鉗全細(xì)胞記錄模式分析OT對(duì)其膜電位和細(xì)胞膜上離子通道的影響;通過鈣成像方法監(jiān)測(cè)加入OT前后肌間神經(jīng)元胞漿中Ca2+濃度的改變;通過ELISA的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)LMMP標(biāo)本中IP3含量及OT釋放量;通過免疫熒光雙標(biāo)觀察OT受體(OTR)、BK通道α亞基、胞漿中OT及IPANs的標(biāo)記物calbindin28K在神經(jīng)元上的表達(dá)情況。
   實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
   1、OT對(duì)AH神經(jīng)元膜電

5、位的影響
   AH神經(jīng)元的靜息電位為-54mV±1mV(n=30),連續(xù)給藥15s后,濃度在10-7M-10-5M的OT均使膜電位發(fā)生超極化,幅度分別為4.4mV±0.5mV(P<0.05,n=9;OT10-7M),12.7mV±0.7mV(P<0.05,n=8;OT10-6M)和8.9mV±0.8mV(P<0.05,n=8;OT10-5M)。將AH神經(jīng)元用OTR阻斷劑atosiban(10-6M)孵育1min之后再給予OT,

6、原本OT誘發(fā)的超極化反應(yīng)基本消失。
   2、OT對(duì)AH神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢粎?shù)的影響
   連續(xù)給予OT(10-6M)60s之后,AH神經(jīng)元的1/2動(dòng)作電位時(shí)程(actionpotentialhalfwidth,AP1/2)由3.2ms±0.4ms降至2.9ms±0.3ms(P=0.04,n=12),閾刺激(threshold)由69mV±10mV增至130mV±21mV(P=0.02,n=12),去極化速率(actionp

7、otentialmaximaldepolarization,APdv/dt)及動(dòng)作電位幅度(actionpotentialamplitude,APamp)均不發(fā)生改變。
   3、OT對(duì)AH神經(jīng)元外向離子流的影響
   在膜片鉗電壓鉗模式下,設(shè)置一個(gè)100ms的step,將鉗制電位從-80mV升至+50mV,觀察激發(fā)出的外向離子流。連續(xù)給藥60s后,三種濃度的OT均使這種外向離子流增加,增加的幅度分別為552pA±72p

8、A(P<0.05,n=8;OT10-7M),1035pA±122pA(P<0.05,n=8;OT10-6M)和1116pA±100pA(P<0.05,n=8;OT10-5M)。若將細(xì)胞先用BK通道(largeconductancecalcium-activatedpotassiumchannels)的阻斷劑IbTX孵育1min再加入OT,原本OT引起的外向離子流增加的現(xiàn)象基本消失。但I(xiàn)K通道(intermediateconductanc

9、ecalcium-activatedpotassiumchannels)的阻斷劑clotrimazole和SK通道(smallconductancecalcium-activatedpotassiumchannels)的阻斷劑apamin均無此作用。
   為確定BK通道是否在AH神經(jīng)元上有功能性表達(dá),進(jìn)一步觀察BK通道的激動(dòng)劑NS1619對(duì)外向離子流的影響,發(fā)現(xiàn)當(dāng)膜電位牽制在+50mV時(shí),NS1619可使其增大748pA±14

10、1pA(P=0.002,n=8),該作用可完全被IbTX阻斷。
   4、OT對(duì)肌間神經(jīng)元中鈣離子濃度的影響
   OT可使12/30肌間神經(jīng)元胞漿中鈣離子濃度([Ca2+]i)升高。連續(xù)給藥50s后,[Ca2+]i升高到最大值,且分別在100s(10-7M),150s(10-6M)和250s(10-5M)恢復(fù)到初始水平。三種濃度的OT作用50s分別使胞漿中鈣離子的相對(duì)濃度由基準(zhǔn)值1升高至1.3±0.2(P<0.05,1

11、0-7M;n=8),1.3±0.2(P<0.05,10-6M;n=11)和1.6±0.3(P<0.05,10-5M;n=11)。
   為進(jìn)一步確定胞內(nèi)增加的Ca2+的來源,我們將AH神經(jīng)元分別用鈣庫清空劑thapsigargin(10-6M)和細(xì)胞膜上非特異性的鈣離子通道阻斷劑CdCl2(5×10-5M)孵育10min,再加入OT,外向離子流的增加值分別由678pA±78pA降至182pA±34pA(P<0.001,n=8;D

12、MSO+OTvs.thapsigargin+OT),由1042pA±96pA降至440pA±94pA(P<0.001,n=10;vehicle+OTvs.CdCl2+OT).
   5、OT致AH神經(jīng)元BK通道開放的信號(hào)通路
   將AH神經(jīng)元分別用IP3受體的阻斷劑2-APB(10-4M)和PLC的阻斷劑U73122(10-5M)孵育10min,均可部分逆轉(zhuǎn)OT引起外向離子流增加。LMMP標(biāo)本在含OT(10-6M)的浴

13、液中孵育1min,其中的IP3含量由16.0ng/ml±1.1ng/ml增加至22.0ng/ml±1.4ng/ml(P=0.001,n=16)。用atosiban(10-6M)預(yù)處理之后再加入OT,IP3含量為16.8ng/ml±0.7ng/ml(P=0.003,n=16;OTvs.atosiban+OT)
   6、Atosiban和KCl對(duì)LMMP標(biāo)本OT分泌量的影響
   將LMMP標(biāo)本(20μg/300μl)在柯

14、氏液中孵育3min,OT分泌量為33.2ng/ml±2.6ng/ml(n=7),向柯氏液中加入atosiban(10-6M)或KCl(2×10-6M),OT分泌量分別增至47.1ng/ml±3.5ng/ml(P=0.01,n=7;atosibantreatmentvs.control)和45.4ng/ml±2.5ng/ml((P=0.02,n=7;KC1treatmentvs.control)。同時(shí)向柯氏液中加入atosiban和KCl

15、,OT分泌量增至62.6ng/ml±5.0ng/ml(P=0.002,n=7,KCl+atosibanvs.KCl;P=0.005,n=7,KCl+atosibanvs.atosiban).
   7、OTR和BK通道在LMMP標(biāo)本上的定位
   OTR在部分肌間神經(jīng)元細(xì)胞膜上表達(dá),其中63/71陽性表達(dá)細(xì)胞呈圓形或橢圓形,近似于DogieltypeⅡ/AH神經(jīng)元的形狀。BK通道α亞基與OTR陽性表達(dá)細(xì)胞完全重合。

16、>   8、OT和calbindin28K在LMMP上的表達(dá)
   OT和AH神經(jīng)元的標(biāo)記物calbindin28K均在部分LMMP的神經(jīng)元上表達(dá)。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),73.1%(122/167)的OT陽性細(xì)胞上有calbindin28K表達(dá),而82.4%(122/148)的AH神經(jīng)元上有OT表達(dá)。
   結(jié)論:
   OT作用于大鼠肌間神經(jīng)叢AH神經(jīng)元上的OT受體,激活細(xì)胞中的OTR-PLC-IP3-Ca2+信號(hào)通路,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論