Marc-145細胞周期同步化及PRRSV細胞受體表達與病毒感染的關(guān)系.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的高度接觸性傳染病，是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。該病于1987年首先在美國爆發(fā)，而后在全球范圍內(nèi)迅速蔓延開來，該病毒于1996年首次在中國大陸分離到，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。
　　 PRRSV感染宿主細胞首先通過與細胞膜表面上的特異性受體結(jié)合，利用細胞的

2、內(nèi)吞作用而感染細胞。至今，已經(jīng)報道的與PRRSV感染相關(guān)的細胞受體有唾液酸粘附素(Sialoadhesin，Sn)、硫酸乙酰肝素（Heparin sulphate，HS）、波形蛋白(Vimentin)、清道夫受體(CD163)。本實驗室利用針對PRRSV GP5蛋白的單克隆抗獨特型抗體(Mab2-5G2)，在PRRSV易感細胞上發(fā)現(xiàn)并證明了非肌肉肌球蛋白重鏈ⅡA(Non-musclemyosin heavy chainⅡ A，NMHC-

3、ⅡA)為PRRSV的細胞受體蛋白。
　　 一個完整的細胞周期是指細胞從上一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂完成的過程。在這一完整的過程中，細胞的染色體得到復(fù)制，細胞內(nèi)各組分含量加倍，最后平均分配到兩個子代細胞中。通常一個的細胞周期可以劃分為四個連續(xù)的時相:G1期、S期、G2期和M期。在同種細胞組成的細胞群體中，不同的細胞可能處于細胞周期的不同時期，處于細胞周期不同階段的細胞，其形態(tài)學(xué)和生化特性均有所不同，對藥物、輻射、病毒的感染也

4、均有所不同。本研究的目的是將Marc-145細胞同步化，研究處于不同細胞周期的Marc-145細胞上PRRSV受體的差異及與PRRSV感染之間的相互關(guān)系。
　　 1.Marc-145細胞同步化方法的建立:通過探索血清饑餓法與藥物阻滯法等細胞同步化方法，最終確立了同步化Marc-145細胞的方法:用含1％FBS的DMEM培養(yǎng)基饑餓細胞72h將細胞同步化至G0/G1期;同步化至G0/G1期的細胞重新按1×105個/mL的細胞數(shù)傳代，

5、然后用含10％ FBS的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)17h，將細胞同步化至S期;在同步化至S期的細胞培養(yǎng)基中加入0.05μg/mL的Nocodazole作用8h，將細胞同步化至G2/M期。
　　 2.PRRSV對不同周期Marc-145細胞的易感性:為闡明PRRSV對處于不同周期細胞的易感性，用PRRSV感染處于不同細胞周期的Marc-145細胞，檢測病毒的吸附與感染。檢測結(jié)果顯示，處于G2/M期的Marc-145細胞比處于S期的Ma

6、rc-145細胞易被PRRSV感染。
　　 3.PRRSV細胞受體在Marc-145細胞不同周期內(nèi)的表達水平:為了解析PRRSV對處于不同細胞周期的易感性的差異，對處于不同細胞周期的Marc-145細胞內(nèi)PRRSV細胞受體表達水平進行了測定。試驗結(jié)果顯示，CD163在G0/G1期細胞內(nèi)表達水平最高，G2/M期次之，S期的表達量最低; NMHC-ⅡA在G2/M期內(nèi)表達水平最高，G0/G1期次之，S期的表達量最低;Vimentin則