PRRSV不同素株感染MARC-145細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及ZCYZ株感染性克隆的拯救.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)感染所致的一種病毒性傳染病。該病以繁殖障礙、呼吸道疾病、免疫抑制和持續(xù)性感染等為主要特征。在體內(nèi)，PRRSV主要感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(Porcinealveolarmacrophages，PAM)；在體外，主要感染非洲綠猴腎細(xì)胞系MA-104及其衍生物MARC-145細(xì)胞。為了深入了解PRRSV感

2、染后宿主細(xì)胞的反應(yīng)以及不同毒株之間致病性的差異，本論文進(jìn)行了以下研究：
　　 本研究首先對(duì)三株P(guān)RRSV(SD1株、SX-1株和ZCYZ株)的致病性進(jìn)行了分析，通過(guò)序列比對(duì)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明：SD1株為傳統(tǒng)毒株，Nsp2沒(méi)有缺失；SX-1株為高致病性毒株，Nsp2缺失30個(gè)氨基酸；ZCYZ株為從野豬中分離得到的高致病性毒株，Nsp2缺失了54個(gè)氨基酸，毒力介于SD1和SX-1之間。
　　 分別用SD1株、SX-1株和ZCYZ

3、株感染MARC-145細(xì)胞，于感染后48h收取細(xì)胞樣本，運(yùn)用iTRAQ技術(shù)(同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù))結(jié)合質(zhì)譜鑒定(MALDI-TOFMS/MS)的方法分析不同致病性PRRSV毒株感染MARC-145細(xì)胞后相關(guān)蛋白表達(dá)的差異。結(jié)果三組(SD1vsMARC-145；SX-1vsMARC-145；ZCYZvsMARC-145)總共鑒定了233個(gè)差異蛋白，這些蛋白可以歸結(jié)為與形態(tài)相關(guān)，與蛋白的合成及代謝相關(guān)，與熱應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)以及與泛素蛋白

4、酶體通路相關(guān)。
　　 對(duì)鑒定到的差異蛋白進(jìn)行Pathway分析，篩選出顯著的、準(zhǔn)確的、靶向的Pathway(Pathway-Analysis)?；谶@些差異表達(dá)的蛋白，我們構(gòu)建了蛋白與蛋白之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，研究蛋白間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，并從網(wǎng)絡(luò)中找到起信號(hào)中樞的核心蛋白(Signal-Net)，而后對(duì)這三組數(shù)據(jù)中都存在的差異蛋白HSPA8的上調(diào)和ANXA2的下調(diào)用Western-blot的方法進(jìn)行了驗(yàn)證。
　　 PRRSV

5、ZCYZ株分離自我國(guó)雜交的野豬群，該品種擁有75％的野豬血統(tǒng)和25％的杜洛克家豬血統(tǒng)。雜交的野豬能夠穩(wěn)定遺傳并在外型上保留了野豬的特征。除此之外，它們脂肪含量較低，對(duì)外周環(huán)境有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。為了進(jìn)一步闡述ZCYZ株的遺傳特征及Nsp2處缺失的54個(gè)氨基酸對(duì)病毒致病力的影響，我們對(duì)其全基因進(jìn)行了測(cè)序分析，并構(gòu)建了感染性cDNA克隆。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了感染性克隆被成功拯救。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明拯救的克隆化病毒相對(duì)于母本毒株毒力與致病力而言較弱