轉(zhuǎn)SsBHMT基因擬南芥的耐缺硫性評(píng)價(jià)及其導(dǎo)入基因的表達(dá)分析.pdf

1、硫是植物的必須營(yíng)養(yǎng)成分之一，硫供應(yīng)不足不僅影響到作物的產(chǎn)量而且影響到品質(zhì)。甲硫氨酸(Met)是一種含硫的α-氨基酸，它是構(gòu)成人體的必需氨基酸之一，因其不能在哺乳動(dòng)物體內(nèi)自身生成，所以必須由外部獲得。甲硫氨酸的含量也經(jīng)常限制農(nóng)作物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。甲硫氨酸除了營(yíng)養(yǎng)方面的重要性外，也參與起始mRNA的翻譯，蛋白質(zhì)的合成，以及在許多細(xì)胞代謝過程中起到調(diào)節(jié)作用。甲硫氨酸不僅是植物中細(xì)胞的主要代謝產(chǎn)物，而且在S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)作用下生成

2、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）。SAM是生物內(nèi)主要的甲基供體，參與乙烯、多胺、木質(zhì)素和滲透調(diào)節(jié)劑的生物合成，并且與植物抗逆反應(yīng)等關(guān)系密切。甜菜堿高半胱氨酸-S-甲基轉(zhuǎn)移酶(BHMT)是一種甲基代謝酶，存在于動(dòng)物和微生物體內(nèi)，催化甜菜堿向高半胱氨酸轉(zhuǎn)移甲基，生成甲硫氨酸。因此本研究分析了轉(zhuǎn)化SsBHMT基因擬南芥的耐缺硫性、導(dǎo)入基因的表達(dá)、甲硫氨酸含量，希望為研究植物體內(nèi)甲硫氨酸的合成與代謝機(jī)制、探討SsBHMT基因在植物抗缺硫脅迫中的作用提

3、供理論依據(jù)。具體試驗(yàn)如下:
　　 1.表型觀察發(fā)現(xiàn)，在缺硫脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片枯黃程度低于野生型;正常條件下，無論是否加甜菜堿，轉(zhuǎn)基因擬南芥比野生型長(zhǎng)得健壯，根密度也高;正?；蛉绷驐l件下加入甜菜堿，轉(zhuǎn)基因型根長(zhǎng)明顯大于野生型。
　　 2.生理生化分析表明，正常與缺硫條件下轉(zhuǎn)基因擬南芥的SOD活性都比野生型要高;缺硫條件下，轉(zhuǎn)化苗的葉綠素含量比野生型高，丙二醛(MDA)含量比野生型低;在缺硫條件下，加入甜菜堿后轉(zhuǎn)基

4、因型SOD活性及葉綠素含量都比野生型要高。
　　 3.免疫分析導(dǎo)入基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，目的蛋白在缺硫以及添加甜菜堿條件下的轉(zhuǎn)化苗中表達(dá)沒有明顯的變化;在不同時(shí)間點(diǎn)缺硫和缺鹽脅迫的轉(zhuǎn)化苗中也無明顯的變化;50 mmol/L NaCl脅迫，目的蛋白的表達(dá)量與正常相比并沒有表觀上的變化，而75 mmol/L NaCl處理使目的蛋白的表達(dá)量減弱;在正常條件下加入甜菜堿目的蛋白表達(dá)降低，50 mmol/L NaCl條件下加甜菜堿的與不加甜菜堿