Tetherin蛋白對HBV復制及表達的下調(diào)作用.pdf

1、目的:構(gòu)建Tetherin真核表達質(zhì)粒，研究Tetherin蛋白在肝細胞中對乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)復制的影響及其作用機制，為抗HBV感染研究提供新的思路。
　　方法:PCR擴增人源Tetherin基因，構(gòu)建Tetherin真核表達質(zhì)粒。用RT-PCR和Western blot的方法鑒定重組質(zhì)粒pTetherin-FLAG在HepG2細胞中的表達。將質(zhì)粒pTetherin-FLAG轉(zhuǎn)染至HepG2

2、.2.15細胞，通過Southern blot、熒光定量PCR、ELISA、Western blot檢測手段，了解Tetherin對HBV復制的影響;加入對抗Tetherin作用的pVpu后，檢測HBV復制及表達水平，進一步驗證Tetherin對HBV的影響。
　　結(jié)果:通過酶切鑒定和DNA序列測定表明正確的將Tetherin基因克隆至真核表達載體pcDNA3.1-3FLAG。轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pTetherin-FLAG至HepG2細

3、胞后，RT-PCR和Western blot檢測到有Tetherin的表達。將pTetherin-FLAG轉(zhuǎn)染至HepG2.2.15細胞，Southern blot和熒光定量PCR結(jié)果顯示細胞內(nèi)HBV DNA、HBV mRNA水平均顯著減少，ELISA結(jié)果表明細胞分泌HBsAg、 HBeAg顯著減少(P＜0.05)，Western blot結(jié)果顯示HBcAg蛋白表達明顯降低(P＜0.05)。當加入pVpu真核表達質(zhì)粒后，HBV的復制及表